120 likes | 403 Vues
Praktiká 3 zs Stafylokokové infekcie. Diagnostika stafylokokových infekcií Diagnostický model: absces - hnis, enterotoxikóza - zvyšky potravín, osteomyelitída - punktát, Mikroskopia, kultivácia, biochemické testy, dôkaz patogenity, citlivosť na ATB. Diagnostika stafylokokových infekcií.
E N D
Praktiká 3 zsStafylokokové infekcie • Diagnostika stafylokokových infekcií • Diagnostický model: absces - hnis, enterotoxikóza - zvyšky potravín, osteomyelitída - punktát, • Mikroskopia, kultivácia, biochemické testy, dôkaz patogenity, citlivosť na ATB
Diagnostika stafylokokových infekcií • Mikroskopicky - z bazy abscesu, aspirát, punktát - obvykle málo baktérií a viac PMNL, krv na hemokultiváciu - obvykle málo baktérií - menej ako 1/ml, v zbytkách potravy pri enterotoxikóze - nedostatočný dôkaz • Kultivácia - krvný agar, manit slaný, pigment, hemolýza • Identifikácia - biochemicky • Dôkaz plazmakoagulázy, toxínov, enzýmov, • analýza nukleových kyselín • Sérologicky - protilátky proti kyseline teichoovej - imunodifúziou - dôkaz dlhodobého ochorenia - bakterémia, endokarditída
Odoberaný materiál • Absces - hnis - sterilne odobratý • enterotoxikóza - zvyšky potravín - dôkaz toxínu, prítomnosť stafylokoka nestačí • osteomyelitída - punktát, sekrét - sterilne odobratý, aj krv na hemokultiváciu
Mikroskopický preparát • Bujónová kultúra Staphylococcus aureus - fixovaná a zafarbená podľa Grama : G+ koky v zhlukoch - nákres
Kultivácia Stafylokokov • Krvný agar: Stafylococcus aureus - šedé až žlté pigmentované kolónie, vypuklé, mazľavé, beta hemolýza, • Stafylococcus epidermidis - biele kolónie, bez hemolýzy • Rast na pôde s prítomnosťou NaCl a indikátorom - Manit slaný - rastie len St. Aureus - zmena červenej farby na žltú
Vlastnosti - dôkaz plazmakoagulázy - nákres • Voľná • Viazaná • Sklíčková • Skúmavková metóda
Voľná koaguláza • Skúmavková metóda – kolonia testovaného kmeňa sa emulzifikuje v 0,5 ml plasmy. Inkubuje sa 6 h.pri 37*C, potom pri izbovej teplote 24 hrs. • Odčítava sa za 1 hod, 2 hod and 24 hod. • metóda – sledovanie tvorby koagula = pozit., • Kvôli možnej prítomnosti fibrinogénu v plazme môže byť koagulum rozpustené preto je potrebné odčítavať po 1,2,aj 24 hod
Viazaná koaguláza • Sklíčková metóda • V 2 kvapkách sterilnej vody alebo FR vytvorte suspenziu testovaného kmeňa, pridajte kvapku plazmy Odčítava sa o 10-15 sec. • Biely precipitát = pozit. • Negatívny výsledok musí byť potvrdený skúmavkovou metódou
Detekcia katalázy Kataláza: - enzym, hydrolysujúci H2O2 , ktorý je toxický pre bunku pričom vzniká kyslík ( prejaví sa ako bublinky).. Pozitívny u Stafylokokov, negatívny u streptokokov
Určenie citlivosti na ATB - princíp • Diskový difúzny test • 6-8 ATB na platňu • zóna inhibície rastu v mm - porovnanie so štandardami Bez zóny inhibície - rezistencia na testované ATB Zóna inhibície rastu - dostatočne veľká ATB disk Rast testovanej baktérie Malá zóna inhibície
Citlivosť na ATB • Staphylococcus aureus - PNC - penicilináza, semisyntetické PNC: oxacilin, methicilin rezistencia na oxacilin ( znamená rezistenciu na ostatné betalaktámové a cefalosporínové ATB ) - MRSA - alterácia na úrovni cieľovej štruktúry - pencilin viažúci protein PBP - chromozomálny typ - súvisiaca s rezistenciou na ostatné atb - klindamycin, erytromycin, aminoglykozidy - Dobrá citlivosť na vankomycin (možnosťprenosu rezistencie na vankomycín zs nozokomiálnych kmeňov Strep.faecalis – na St. aureus • Problematika MRSA, CoMRSA • Staphylococcus epidermidis a ostatné PK negat. – rezistencia na oxacilín častejšia
Porovnanie citlivosti • Streptococcus pyogenes – HSA / Staphyolococcus aureus PNC, TET • Staphylococcus aureus / Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus haemolyticus OXA, CEF,