1 / 17

MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI

MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI. MUTAGÉN. Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását, melyek egy része a sejtek genetikai állományát is károsítja! Egyik lehetséges mód: MUTÁCIÓ

ordell
Télécharger la présentation

MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript


  1. MUTÁCIÓ ÉS KIMUTATÁSI MÓDSZEREI

  2. MUTAGÉN • Az emberi szervezetre, annak természetes és mesterséges környezetéből nagyszámú toxikus tényező fejtheti ki hatását, melyek egy része a sejtek genetikai állományát is károsítja! • Egyik lehetséges mód: MUTÁCIÓ • Watson és Crick 1953: DNS kettős spirálszerkezetének és önreprodukciós képességének kimutatása

  3. DNS kettős spirál szerkezete

  4. Szemikonzervatív replicatio: DNS sejtosztódás előtti megkettőződése • Szemikonzervatív, mert az egyik lánc az eredeti DNS molekulából származik a másik újonnan szintetizálódik • DNS replicatio során létrejöhetnek „hibák” mutációk következő megkettőződéssel továbbadódik, ha nem keletkezik ellentétes mutáció (reserv) • Mutáció a genom megváltozása • Gyakorlati szempontból: pontmutáció, kromoszóma aberratio • A legtöbb mutáció spontán és váratlan

  5. DNS-molekula szemikonzervatív replicatioja

  6. Benignus polimorfizmus A kimutatott mutációnak ‘nincs’ klinikai relevanciája Genetikai értelemben akkor használjuk, amikor olyan mutációt takar, amelyek genetikailag még nem mutathatók ki azon egyéneknél akiknél a klinikai relevanciák megtalálhatók Kockázati mutáció A betegség kialakulását nem okozza, de a betegség kialakulásához hozzájárul a jelenléte

  7. Mutáció szűrési módszerek A mutáció szűrési eljárások során keressük a betegséget / szindrómát okozó mutációt, vagyis a mutáció elváltozás / betegség kapcsolatot derítjük fel! Linkage analízis: Eltérő DNS polimorfizmusokat keresünk a beteg és a kontroll DNS-ében Ismert mutáció kimutatása: annak eldöntésére végezzük, hogy az illető a kérdéses megbetegedésben szenved-e, vagy annak kockázatát hordja-e a génszerkezetében Ez a leggyakrabban használt eljárás A betegségért felelős mutáció keresése:Keressük az adott betegségben szenvedők adott génjében azokat a mutációkat, amelyek csak a betegeknél mutathatók ki

  8. A betegségért felelős mutáció(k) keresési stratégiája • A gén adott szakaszait PCR reakcióval amplifikáljuk • Az így nyert DNS-ben mutáció szűrési eljárásokkal mutációt keresünk • A mutációt nukleotid szekvencia analízissel azonosítjuk • Vizsgáljuk, hogy a talált mutáció benignus polimorfizmus, vagy betegségért felelős mutáció • Vizsgáljuk a mutáció hatását a DNS szekvenciára, aminosav összetételre, fehérje szerkezetre

  9. Mutáció szűrési eljárások • DGGE: Denaturáló grádiens gél elektroforézise • TGGE: Hőmérséklet grádiens gél elektroforézise • SSCP: Egyszálú DNS konformációs változatai • Heteroduplex analízis • CFLP:Heteroduplexek vágása 1.Kémiai módszerrel történő vágás 2.Enzimatikus módszerrel történő vágás 3.Speciális enzimmel történő vágás • Mismatch binding proteinek kötődésén alapuló eljárás • PTT

  10. TGGE: Hőmérséklet grádiens gél elktroforézise

  11. SSCP: Egyszálú DNS konformációs változatai

  12. A mutáció azonosítása nukleotid szekvencia analízissel 1.A kérdéses gén szakaszról PCR segítségével másolatot készítünk 2.A PCR azonosságát és tisztaságát ellenőrizzük 3.Nukleotid szekvencia meghatározás 4.A szekvenálást mindkét irányból el kell végezni 5. A mutáns és kontroll szekvenciájának összehasonlítása

  13. PCR: polimeráz láncreakció

  14. Heterozigóta mutáció kimutatás PCR-SSC, nukleotid szekvencia analízissel Pedigre PCR-SSCP analízis Heterozigóta mutáns szekvencia Vad nukleotid szekvenciája

  15. PCR-SSCP

  16. Felhasznált irodalom: Dr. Papp Zoltán: Klinikai genetika DE-OEC: Alapvető Molekuláris Biológiai Módszerek (Debrecen 2003.) Kép: Internet Készítette: Kolocsán Tünde Biológia-környezetvédelem II. évfolyam Nyíregyháza, 2004. November 13.

  17. KÖSZÖNÖM A FIGYELMET!

More Related