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Gramicidina S. 2 Phe, 2 Orn, 2 Pro, 2 Leu, 2 Val VOLFP. TOCSY. NOESY. COSY: cross-picchi evidenziano solo le correlazioni tra protoni connessi da non più di tre legami. 2) Correlazioni tra protoni alifatici. 1) fingerprint. VOLFP. Ha. Protoni a. NH. VOLFP.
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Gramicidina S 2 Phe, 2 Orn, 2 Pro, 2 Leu, 2 Val VOLFP
TOCSY NOESY
COSY: cross-picchi evidenziano solo le correlazioni tra protoni connessi da non più di tre legami 2) Correlazioni tra protoni alifatici 1) fingerprint VOLFP Ha Protoni a NH
VOLFP Regione amidica: ci si aspettano 4 correlazioni NH-Ha 7.2 9.1 8.7 8.3
Regione fingerprint 4.36 4.41 4.57 4.77 7.23 9.1 8.68 8.34
HaP5 4.32 4.36
Sistema di spin della prolina B2(1.94) b1(1.46) Hb1 Hb2 Hg Hg (2.48) Hd Hd (3.59) Ha In giallo lo spettro TOCSY dove si vedono correlazioni scalari a più di tre legami
Non sembrano esserci ulteriori correlazioni oltra Ha-Hb b1 2.98 b22 .88 L’unico a.a. della sequenza che non ha protoni oltre i beta è Phe Hp: sistema di spin della Phe Ha 4.36
Non ho correlazione con i metili a campi alti, quindi può essere solo O Hg1Hg2 Hb2 Hb1 Hd Ha 4.77 Sistema di spin dell’ornitina
P F O Questi due protoni alfa devono essere quelli di Val e Leu che si distinguono perché la valina ha un sistema di spin più corto
Hg 0.8 Hb 2.08 Ha 4.41 Sistema di spin della valina
La correlazione rimasta inassegnata nella regione fingerprint a 8.34 e 4.57 deve essere la Leu Hb Ha
Regione fingerprint 4.36 4.41 V 4.57 L 4.77 O F 7.23 9.1 8.68 8.34
Sovrapposizione dello spettro COSY e NOESY (rosso) HaV-HNO F Niai-1 L F HaL-HNF O aiNi+1 HaO-HNL aiNi VOLFP
F Ha HaL VOLFP
Rosso: noesy, azzurro: tocsy HbL HbO HbV F Har-HbF HbF HNV-HdP HaL HaV HaL NH2O O VOLFP
Azzurro: TOCSY Rosso: NOESY Correlazione b1b2P è un picco sia TOCSY che NOESY Si può usare per calibrare le distanze HgP-HaF HdP-HaF
Il software ne calcola l’integrale (volume) in modo automatico
Nella dimensione F1 c’è poca risoluzione, quindi i picchi non sono ben separati
Restraints list Object Integral [abs] ν(F2) ν(F1) Integral 1 151810000.00 1.9440 1.4917 b1b2 Pro 1.8 Å Integral 2 36027000.00 9.0926 4.5819 aLeu-NHPhe Integral 3 45930000.00 8.6721 4.4108 aVal-NHOrn Integral 4 54024000.00 8.3249 4.7702 aOrn-NHLeu Integral 5 54753000.00 4.7604 8.3298 aOrn-NHLeu 2.16 Å Integral 6 42051000.00 4.5722 9.0999 aLeu-NHPhe 2.27 Å Integral 7 49753000.00 4.4010 8.6818 aVal-NHOrn 2.20 Å Integral 8 6340100.00 4.572 8.329 aLeu-NHLeu 3.12 Å NOE b1b2= k/r6b1b2 NOEaOrn-NHLeu= k/r6aOrn-NHLeu