1 / 11

BIOKIMIA

BIOKIMIA. ENZIM LIPOPROTEIN LIPASE suatu alternatif pemeriksaan gangguan metabolisme lemak pada penderita DM TIPE 2 IN VITRO. #1 PENDAHULUAN.

palani
Télécharger la présentation

BIOKIMIA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. BIOKIMIA ENZIM LIPOPROTEIN LIPASE suatualternatifpemeriksaangangguanmetabolismelemakpadapenderitaDM TIPE 2 IN VITRO RizkyNurhayati

  2. #1 PENDAHULUAN Faktortimbulnyapenyakitjantungkoroner (PJK) adalahdislipidemiaatauadanyapeningkatan serum lipid, usia, jeniskelamin, stress, faktorketurunanserta Diabetes melitus (DM), kegemukandanhipertensi. Rizky Nurhayati

  3. Pada diabetes melitustipe 2 (NIDDM) yang merupakanpopulasiterbesarpadapenderita DM (lebihdari 90%) biasanyadikutidengangangguanmetabolismelemak, yang ditandaidenganhiperglikemiakronikdanhaliniterjadipada DM tipe 2 denganglukosadarahterkendalimaupuntidakterkendali. Rizky Nurhayati

  4. #2 TahapanPenelitian 1. Pengambilansampel Pengambilansampeldilakukansetelahsubyekpenelitianpuasa 10 - 12 jam (subyekbolehminum air putih). Sebelumsampeldiambil, subyekdudukselama 5 menit, kemudiandilakukanujialergi heparin. 2. IsolasiEnzim IsolasiEnzim Lipoprotein Lipase (LPL) dilakukandenganmenggunakanmetodesentrifugasi. 3. PenentuanKondisi Optimum Penentuan pH optimum dilakukanpadaenzimhasilisolasidari plasma post heparin denganvariasi pH sebesar 6.4; 6.8; 7.0 dan 7.4 dandiukurpadasuhu 37oC. Rizky Nurhayati

  5. 4. PemurnianEnzimKasar Lipoprotein Lipase (LPL) Enzimkasar LPL dimurnikandenganmetode pengendapanbertingkatmenggunakanamoniumsulfat. • PenentuanBeratMolekul LPL Penentuanmasamolekulrealtif (BM) dari LPL dilaukandengan SDS PAGE. Untukmenentukanmassamolekulrelatif enzim, makadilakukandenganmenghitungRf(Retardaction Factor) darimasing-masing pita, dimana: Jarakpergerakan pita daritempatawal Rf = Jarakpergerakanwarnadaritempatawal Rizky Nurhayati

  6. 6. PenentuanKonstantaKinetikaReaksi Dilakukandenganmengujiaktivitas crude enzyme LPL hasilisolasidari plasma post heparin, padakondisi optimum denganvariasisubstratsebesar 0.5%, 1%, 1.5%,dan 2% (dalam % volume per volume). 7. Ujiaktivitas crude enzyme LPL berdasarkankondisi optimum aktivitas LPL adalahkemampuan LPL dalammenghidrolisatrigliserida . Satu unit aktivitasenzim LPL adalahdidefinisikansebagaijumlahmikromoldariasamlemakbebas (FFA) per mililiterenzimpermenitperdesiliterdarahpadakondisi optimum. Rumus yang digunakan: N NaOH x V NaOH x T x fp AKTIVITAS = VE x T Rizky Nurhayati

  7. #3 HasilPenelitian Dari hasilisolasienzim lipoprotein lipase (LPL) dari plasma post heparin didapatkan crude enzyme LPL. Selanjutnya crude enzyme inidigunakanuntukmencarikondisi optimum kerjaenzimsecara in vitro. Enzimhasilisolasiditentukankondisioptimumnya berdasarkanvariasi pH (6.0; 6.4; 7.0;dan 7.4 ), suhu (30; 32; 35 dan 37 )oC,danwaktuinkubasi (10; 15; 20 dan 25 ) menit. Rizky Nurhayati

  8. Penentuan pH Optimum Dari hasilpenentuan pH optimum enzim LPL didaptkan pH optimum sebesar 6,8oC • PenentuanSuhu Optimum Penentuansuhu optimum enzim LPL dilakukanpadavariasisuhu (30; 32; 35; dan 37) oC, dandiukurpada pH 6.8 danwaktuinkubasiselama 15 menit. • PenentuanWaktuInkubasi Optimum Penentuanwaktuinkubasi optimum enzim LPL dilakukanpadavariasiwaktuinkubasi (10; 15; 20; dan 25 ) menit, dandiukurpada pH 6.8 dansuhu 32oC. Rizky Nurhayati

  9. PenentuankinetikaenzimmenurutLehninger (1995), dapatditentukanberdasarkanpadanilai Km dan VM. Untuk menentukankecepatanreaksikinetikaenzimdilakukandenganmemberikanvariasikonsentrasisubstratdengankonsentrasienzimtetap. Hal inikarenakonsentrasienzim yang tetapdankonsentrasisubstrat yang semakinbesarakanmenyebabkankenaikanaktivitasenzim, karenadenganmeningkatnyakonsentrasisubstrat, makasemakinbanyakenzim yang berikatandengansubstrat, sehinggaproduk yang dihasilkanakanbanyak. Rizky Nurhayati

  10. #3 Pembahasan Dari plasma post heparin dapatdisolasienzim LPL, selanjutnyahasilisolasiinidiujiaktivitasnya. Enzimhasilisolasiditentukankondisioptimumnyaberdasarkanvariasi pH (6.0; 6.4; 7.0;dan 7.4), suhu (30; 32; 35 dan 37)°C, danwaktuinkubasi (10; 15; 20 dan 25) menit. Hal inimengingatsetiapenzimmempunyaikondisikerja optimum yang berbedatergantungdarijenisdansumberenzimtersebut (10). Kondisikerja optimum LPL ditentukanbesarnilaiaktivitasenzim yang tertinggidengansatuan unit. Satu unit aktivitasenzim LPL didefinisikansebagaijumlahmikromolasamlemak yang dibebaskanpermililiterenzim per menitpadakondisioptimumnya. Rizky Nurhayati

  11. Selesai Thanks you http://file.upi.edu/Direktori/FPMIPA/JUR._PEND._BIOLOGI/197606052001122- Rizky Nurhayati

More Related