生物技術核心實驗

1. 生物技術方法 Methods in Biotechnology 生物技術核心實驗 Biotechnology Core Techniques BCT

2. 效率 激勵 成功 本課程的基本教學理念 (策略) 核心 基礎 共通

3. 所有生物科技的 共通 核心 基礎 DNA 複 製 Replication Reverse Transcription 逆轉錄 轉 錄 Transcription RNA 轉 譯 Translation Protein

4. BCT Transcription DNA RNA Regulation Translation Protein 以實際操作來體驗Central Dogma

5. Bam HI T5 promotor lac O RBS 6 x His pQE-31 pBlueGus MCS stop Hind III Bam HI RBS 6 x His vector target gene pQG-11 stop Hind III 本課程gus 基因群殖策略 gus gus vector target gene

6. Transformation 宿主菌 pQG-11 濾紙 GUSmRNADNA Protein Purification SDS-PAGE Probes Colony Hybridization GUS Ab Western Transfer Northern Hybridization Southern Hybridization

7. pBlueGus pQE31 Ladder Ladder 3.4 kb 2 kb HindIII + BamHI HindIII + BamHI uncut HindIII uncut HindIII 以 Restriction map 檢定 gus基因片段 gus→ 1998B TA

8. 以抗體檢定轉形株表現 GUS 蛋白質 Control Transformants 1998A C3

9. in vitro transcription test 以 Northern blotting 檢定 gus基因表現 mRNA ← gusmRNA - + IPTG Probe: PCR product 1998A C3

10. pQE31 pQG transformants guspBlueGus pQE31 BamHI + HindIII 以 Southern blotting 檢定 gus基因 ← gus Probe: in vitro transcription product 1998A C3

11. 252 kD 252 kD 98 98 64 64 50 50 36 36 以電泳及抗體檢定表現蛋白質 ← 純化步驟順序 ← 純化步驟順序 AF IEX GF TP XT marker AF IEX GF TP XT marker GUS GUS 10% SDS-PAGE Western Transfer MW = 70 kD 1998A C3

12. 6 10 1.6 x 90 cm Buffer A-150 a typical result 5 260 kD 10 = 4 70 kD 4 10 3 2 3 10 Vitamin B12 1 目測 0 Elution Volume 以膠體過濾法求得GUS 原態分子量 Sephacryl S-300 分子量 + MW=260 kD GUS

13. 核心 基礎 共通 本課程的基本教學理念 (方法) 效率 激勵 成功

14. 入門指引 操作手冊 上課資料 上課引導方式 快速引導入門 詳細的操作步驟 講習課程補充資料 每日流程 每天實驗的時刻表 中心網頁 所有資料快速獲取

15. 入門指引快速引導上路 實驗室配置地圖 預定課程表 每日時刻表 行事安全規則約定 如何撰寫實驗報告 如何找到你所要的物品 學員名牌名錄 ●馬上熟悉地理環境 ●所有實驗內容名稱 ○協調全班一致行動 ●最重要的安全問題 ●嚴格遵循報告格式 ●組產表與貯藏位置 ○認識不同領域人馬

16. 大 助 助 助 助 助 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 組 實驗班級教學編組 主持教授 DNA、RNA、Protein 各一人 專任教師 一人 負責課程的全盤推動 兼任助教 五人 每人負責一班八人 學 員 四十人 2 × 4 × 5 = 40 二人一組 四組一班 共五班

17. 課程的執行架構 激勵 教學 考核 排名 上課 示範 小考 週考 實 驗 實驗報告 絕對禁止抄襲 由結業學員中選拔下一班助教 擔任助教是榮譽也是另一種學習

18. BCT BCT BCT 本課程各種結業胸章 普通結業胸章 榮譽結業胸章 助教胸章 四十名 二至五名 五名

19. 早期同學們的評語 三位老師均十分熱心且有耐性，是本人在大學中遇過少見的好老師，非常感謝！ 本次課程是我在台大上過最完整、準備最週到、老師也最好的課程，尤其在暑假，可連貫且專心地學習，獲益良多。 RNA 以前是我最討厭接觸的，上完課後有信心多了。 冷凍離心機可否增加數台？ 老師很有耐心跟我們討論每一次實驗課的數據，很有收穫。 實驗內容很有連貫性。上課時間緊湊。 RNA 成功覺得很高興。 雖然稍嫌擁擠但十分整齊清潔。某些儀器 (ex 離心機) 較不足 …. (助教) 學長 very 認真，說明清楚有耐心 ….. perfect

20. 預期造就何等學生？ 學生成功地體驗了核酸及蛋白質的處理過程， 對實驗的操作與掌握將更具 信心； 另經由討論與考試，交出完整的報告， 將擁有最基本的研究基礎與經驗， 應該在自己的專業上有 解決問題的能力。 由於本課程並未讓學生製備所有 重要試劑， 且許多末梢細節也無法一一交代， 因此學生回到各自的研究室後， 必須小心因此可能造成的問題。