1 / 22

MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ

MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ . Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı . MKH ÜRETİMİ ve SORUNLAR. Sorunlar. Örnek alımı MNH eldesi Kültüre etme Tripsinizasyon Pasaj Tanımlama / Diferansiyasyon Etik / Yasal sorunlar.

beth
Télécharger la présentation

MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. MEZENKİMAL KÖK HÜCRE ÜRETİMİNDE SORUNLAR VE ÇÖZÜMLERİ Dr. Fahri ŞAHİN Ege Üniversitesi Tıp Fakültesi Hematoloji Bilim Dalı

  2. MKH ÜRETİMİ ve SORUNLAR

  3. Sorunlar • Örnek alımı • MNH eldesi • Kültüre etme • Tripsinizasyon • Pasaj • Tanımlama / Diferansiyasyon • Etik / Yasal sorunlar

  4. Kortikal Kemik Spongioz Kemik Kemik İliği Örnek Alımı

  5. Plazma MNH tabakası 800g 20 Dak KİA Fikol Santrifüj Fikol Eritrosit Yıkama 48-72 saat inkübasyon Taze BY Nonadheren hücrelerin atılması İnkübasyon

  6. Tripsinizasyon Tripsin - EDTA 5 dk İnkübasyon

  7. Tripsin blokajı ve yıkama Serum içeren Media veya PBS 800G 10 dk Tekrar kültür ve tripsinizasyon ile 2-6 pasaj

  8. FBS Son yıllara kadar MKH lerin in vitro ekspansiyonu için10% FETAL BOVİNE SERUM (FBS)kullanılıyordu • Virüs, bakteri, prion bulaşı • İmmün veya lokal inflamatuar reaksiyonlar • Engrafman yetmezliği, rejeksiyon Otolog serum kullanımını gündeme getirmiştir

  9. %1 OS %10 OS C A %3 OS %10 FBS B D Proliferasyon : C > D = B > A Osteojenik Dif. : C +++ > D ++ > B + > A 0 Adipojenik Dif. : D +++ > C ++ > B + > A 0 Norbert Stutea et al. Autologous serum for isolation and expansion of human mesenchymal stem cells for clinical use. Experimental Hematology 2004 (Hamburg, Germany)

  10. Türler arasında farklılık • İnsan, sıçan ve tavşanda MKH üretim nispeten kolay • Farede üretim oldukça sıkıntılıdır

  11. Farelerin 5-florourasil ile muamelesi • CD11b’ ye karşı antikor ile immündeplesyon • BY değişikliği: • DMEM yerine α-MEM • Düşük glukoz içerikli BY

  12. Üretilen MKH’ lerin Kalite Kontrolü • Flowsitometrik değerlendirme • CD11b, CD31, CD34 ve CD45 negatif • SH2 (CD105), SH3 veya SH4 (CD73), CD117 (c-kit), CD90 (Thy-1) ve STRO-1 pozitif

  13. Üretilen MKH’ lerin Kalite Kontrolü 2. Diferansiyasyon özelliğinin değerlendirilmesi * Osteojenik diferansiyasyon * Kondrojenik diferansiyasyon * Adipojenik diferansiyasyon

  14. Osteojenik Diferansiyasyon Alkalen fosfataz aktivitesi

  15. Kalsiyum fosfat (Apatit) birikimi ( X-Ray) ESM mineralizasyonu von Kossa boyası

  16. Kondrojenik Diferansiyasyon Gümüş mavisi boyası Safranin O boyası

  17. Adipojenik Diferansiyasyon Lipidden zengin vakuollerin intraselüler birikimi Oil-Red O boyası

  18. Good Manufacturing Practice GMP

  19. That is not dead which can eternal lie, And with strange aeons even death may die Howard Lovecraft For Tissue Engineering…… This is not the end This is not even the beginning of the end But it is the end of the beginning Winston Churchill

More Related