1 / 38

Molekulaarbioloogias kasutatavad meetodid :

Molekulaarbioloogias kasutatavad meetodid :. Rakkude eraldamine ja kasvatamine Organellide eraldamine Makromolekulide (DNA, valgud) analüüs. Kasvajarakkude mikrodissektsioon koest laserikiire abil. Kiirelt kasvavate surematute tubakarakkude liini BY2 rakud vedelkultuuris.

mardi
Télécharger la présentation

Molekulaarbioloogias kasutatavad meetodid :

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Molekulaarbioloogias kasutatavad meetodid: Rakkude eraldamine ja kasvatamine Organellide eraldamine Makromolekulide (DNA, valgud) analüüs

  2. Kasvajarakkude mikrodissektsioon koest laserikiire abil

  3. Kiirelt kasvavate surematute tubakarakkude liini BY2 rakud vedelkultuuris

  4. Fluorestsentskiirgusega aktiveeritav rakkude sorteerija

  5. Imetajaterakkude kultiveerimiseks sobiv sööde

  6. Rekombinantse DNA tehnoloogia

  7. DNA restriktsiooniensüümid e. restriktaasid

  8. Restriktsioonifragmentide ligeerimine

  9. Elektroforees

  10. DNA märgistamine radioaktiivse isotoobiga (P32)(juhuslikud fragmendid)

  11. DNA märgistamine radioaktiivse isotoobiga (P32)(fragmentide otste märgistamine)

  12. Digoksigeniiniga märgistamineTümiini asemel selle analoog, milles metüülrühm on asendatud taimse steroidi digoksigeniiniga. Proov muudetakse nähtavaks digoksigeniini-spetsiifilise antikeha abil, mille küljes on nähtav marker (näiteks fluorestsentsvärv)

  13. Hübridiseerimine

  14. in situ hübridiseerimine metafaassetel kromosoomidel

  15. Nukleiinhapete hübridisatsiooni kasutamine mRNA molekulile vastav regiooni määramiseks genoomses DNAs • Näide: Kasutatakse intronite asukoha määramiseks genoomis • Vajalik on endonukleaas, mis lõikab ainult ühe-ahelalist nukleiinhapet • Analüüs toimub denatureerival agaroosgeelil

  16. DNA-fragmendi sisestamine bakteriaalsesse plasmiidi ligaasi abil

  17. Mingi DNA-järjestuse puhastamine ja paljundamine bakterisse kloonimise teel

  18. Pärmi kunstliku kromosoomi valmistamine (YAC)

  19. Kuidas toota palju valku.Vektor väga tugeva promootoriga

  20. Mingi liigi genoomse DNA kogu valmistamineGenoomset “raamatukogu” säilitatakse tavaliselt erinevaid selle liigi genoomse DNA fragmente sisaldavate bakterite koguna

  21. cDNA süntees

  22. Samast genoomse DNA regioonist valmistatud cDNA ja genoomse DNA kogude erinevus

  23. DNA sekveneerimine e. nukleotiidse järjestuse määramine DNA ahelas

  24. Sekvenaator – automaat DNA järjestuse määramiseks

  25. DNA-järjestuse poolt kodeeritava valgu-järjestuse leidmine

  26. PCR (polymerase chain reaction) – polümeraasi ahelreaktsioon1. tsükkel

  27. PCR (polymerase chain reaction) – polümeraasi ahelreaktsioonJärgnevad tsüklid

  28. Genoomse DNA või cDNA klooni saamine PCR abil

  29. Kuidas PCRi kasutatakse kriminalistikas

  30. DNA-järjestuse alusel saab määrata valgujärjestuse ja vastupidi

  31. Valkude uurimiseks kasutatavad meetodid

  32. Röntgenikiirte difraktsioon võimaldab määrata valgu täpse struktuuri

  33. Valkude analüüs • Valgu molekulaarse struktuuri võib määrata tuumamagnetresonantsi abil • Valgu funktsioonide üle võib otsustada tema järjestuse võrdlemisel mõne tuntud funktsiooniga valgu järjestusega • Affiinsuskromatograafia ja immunosadestamine võimaldavad leida seostunud valke

  34. Valgu funktsiooni uurimisel võib kasutada liitvalke (fusion proteins), samuti võib nende abil valku rakus lokaliseerida.

  35. Valgu lokaliseerimiseks rakus võib tema külge siduda epitoobi (lühikese peptiidfragmendi, mille tunneb ära mingi antikeha)

  36. Valguinteraktsioone saab uurida nn faagdisplei meetodil

  37. DNA-valk interaktsioon (“jalajäljed”, DNA footprinting)

More Related