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Facultad de Ciencias Experimentales

Facultad de Ciencias Experimentales. Área de Bioquímica y Biología Molecular. Oferta de Proyectos de Fin de Grado para GBTG - Curso 2012-2013. Función de los factores de transcripción GATA en el páncreas. Sabemos que en el ratón los factores de transcripción GATA4 y GATA6 juegan un

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  1. Facultad de Ciencias Experimentales Área de Bioquímica y Biología Molecular Oferta de Proyectos de Fin de Grado para GBTG - Curso 2012-2013

  2. Función de los factores de transcripción GATA en el páncreas Sabemos que en el ratón los factores de transcripción GATA4 y GATA6 juegan un papel importante en el desarrollo y formación del páncreas. Si inactivamos conjuntamente GATA4 y GATA6 en estadios iniciales de formación del páncreas, el páncreas NO SE FORMA! (Carrasco et al., JournalofClinicalInvestigation, 2012) Ctrl Gata4 KO Gata6 KO Gata4/6 double KO ba esto du Esto: estómago Ba: bazo Du: duodeno Páncreas? Páncreas

  3. El objetivo de nuestro proyecto consiste en determinar el papel que juegan estos factores en la célula beta de los islotes de Langerhans Técnicas a desarrollar: -Análisis histológicos: Secciones en parafina e tejidos pancreáticos, tinciones con hematoilina y eosina, etc… -Análisis inmunohistoquímicos: Tinción con anticuerpos específicos en secciones de páncreas (incubación con anticuerpos, microscopía de fluorescencia, etc..) -Técnicas de PCR y qPCR (extracción de ARN, etc…) Anabel Rojas, CABIMER anabel.rojas@cabimer.es Tlfn:954 467 427

  4. Juan R. Tejedo beta-lactoglobulina (~65%), alfa-lactoalbumina (~25%), y seroalbúmina (~8%), Inmovilización de un anticuerpo anti-b-lactoglobulina para cromatografía de afinidad

  5. Estudios recientes han encontrado relación entre la beta Lactoglobulina y el desarrollo de diabetes tipo 1 en menores de 18 meses Hay una relación directa entre alimentación temprana con leche de vaca y alergias. -Anticuerpo monoclonal producido en ratón

  6. Resultados obtenidos SELECCIÓN DE HIBRIDOMAS Todos los sobrenadantes obtenidos fueron seleccionados por ELISA frente a la proteína completa BLG y frente a sus dos subunidades α y β. Leche de vaca BLG -BLG -BLG - + + + GG1A7 + + + - GG1B5 GG2C2 + + + + GG3G7 + + + + Los hibridomas GG1B5 y GG1A7 no reconocen la proteína BLG en su forma natural en la leche de vaca. GG4H3 + + + +

  7. PROPÓSITO DE LA INVESTIGACIÓN • Optimizar el procedimiento de inmovilización de inmunoglobulina en el laboratorio • Optimizar un protocolo de purificación de muestras de leche de vaca

  8. Estudio de los efectos de BIO y sus derivados en la activación de la vía Wnt y la auto-renovación de células troncales embrionarias de ratón FACTORES INTRÍNSECOS: Oct Sox2 Nanog ANTECEDENTES FACTORES EXTRÍNSECOS: FGF LIF Wnt BIO, ClLi PLURIPOTENCIALIDAD DIFERENCIACIÓN

  9. PROPOSITOS DEL PROYECTO • Manejo de técnicas de laboratorio: • Cultivo de células madre embrionarias • Técnicas de biología molecular: inmunocitoquímica, citometría, PCR, WB, … • Llevar a cabo una revisión bibliográfica LUGAR DE TRABAJO Yolanda Aguilera García yagugar@upo.es Área de Bioquímica y Biología Molecular

  10. PFG_2013-2014 Investigadora responsable: Marta Artal Sanz Antecedentes: La falta de prohibitinas (PHB-1 y PHB-2) mitocondriales produce efectos opuestos en el envejecimiento: reduce la longevidad de animales salvajes, mientras en condiciones de baja señalización por insulina (InsR/daf-2), aumenta la longevidad de forma dramática. Artal-Sanz and Tavernarakis (2009) Nature

  11. Objetivo PFG_2013-2014 Insulin DAF-2/InsR Descubrir los mecanismos celulares que interfieren con la función mitocondrial y afectan al envejecimiento utilizando el nematodo C. elegans PI3K P FOXO/ DAF-16 PKB/AKT

  12. Interacción mitocondria-rutas de señalización celular en la regulación del envejecimiento en C. elegans PFG_1 Identificación de rutas de señalización implicadas en la reducción del contenido de grasa causado por falta de PHB en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina. DIC GFP Nile red RNAi screen for fat content Automated sorting and analysis phb-2 +/- phb-2 -/- + fluorescent dye: Nile Red Mutantes phb-2 muestran un fenotipo de reducción de grasa y ausencia de GFP en la faringe (panel izquierda). Los mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la ausencia de GFP, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce RNAi para cada gen del genoma de C. elegans y la prueba fluorescente Nile Red. + RNAi library

  13. Escrutinios genómicos para identificar reguladores de la respuesta al estrés mitocondrial en C. elegans PFG_2 Mitochondrial stress response Automated sorting and analysis BF GFP Merged phb-2 +/-; hsp-6::gfp phb-2 -/-; hsp-6::gfp Mutantes phb-2 muestran una fuerte inducción de hsp-6::GFP, una chaperona que responde al estrés mitocondrial (panel izquierda). Mutantes phb-2 se seleccionan utilizando el COPAS BIOSORT (panel derecha), en función de la presencia de GFP en todo el cuerpo, y distribuyen en placas (96 pozillos) que contienen bacteria que produce dsRNA para cada gen del genoma de C. elegans. Animales que expresan GFP sólo en la faringe son eliminados (botella). + RNAi library

  14. PFG_3 Metabolomics y envejecimiento en C. elegans Consecuencias Metabólicas de la falta de prohibitinas mitocondriales en animales salvajes y en mutantes de la ruta de la Insulina

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