Software para el cálculo de mapas de ligamiento genético

1. Software para el cálculo de mapas de ligamiento genético

4. JoinMap

5. Crear un nuevo proyecto: new project • Usar la funcion New Project del menu File • Ir al directorio DemoData que es un sub-directorio,(typicamente C:\Program Files\JoinMap) • Llamarlo tutorial-apellido en el campo File name • Grabar con Save. • Esto creara su proyecto llamado tutorial-apellido.jmp

6. Usar la funcion Load Data del menu File • Ien el dialogo que sigue, click en el file jm20demo.loc (que debe estar en el directorio DemoData) • click en Open.

7. INFO

8. F2 an F2 population: the result of selfing the F1 of a cross between two fully homozygous diploid parents BC1 a first generation backcross population: the result of crossing the F1 of a cross between two fully homozygous diploid parents to one of the parents RIx a population of recombinant inbred lines in the x-th generation: the result of inbreeding an F2 by single seed descent; RI2 is equivalent to an F2 DH a doubled haploid population: the result of doubling the gametes of one heterozygous diploid individual, linkage phases originally (possibly) unknown DH1 a doubled haploid population produced from the gametes of the F1 of a cross between two homozygous diploid parents DH2 a doubled haploid population: the result of doubling the gametes of an F2 population, one doubled gamete from one F2 plant HAP a haploid population: the gametes (or derived individuals) of one heterozygous diploid individual, linkage phases originally (possibly) unknown HAP1 a haploid population derived from the F1 of a cross between two fully homozygous diploid parents CP a population resulting from a cross between two heterogeneously heterozygous and homozygous diploid parents, linkage phases originally (possibly) unknown

9. Re-calculate= F9

11. Population/Exclude

13. X2 Ho: independientes H1: No son independientes

15. 2 1 Loci similares son identicos Que significa? Loci identicos tendran la misma posicion en el genoma

16. En mapas densos es virtualmente imposible obtener individuos identicos asi que esta informacio eprmite descubrir clones que deben ser removidos de analisis subsecuentes • En mapas de baja densidad de marcadores habran muchos individuos identicos

17. Ambos son diferentes vistas del mismo analisis

18. Objetivo del juego • Idealmente lo que se quiere es llegar a tener es el mismo numero de grupos de ligamiento que numero de cromosomas de la especie • En la practica no es facil • En general usar un LOD de 3 pero la experiencia en datasets con muchos marcadores, y sp con muchos cromosomas nos enseña que incluso un LOD de 6 puede indicarnos falso ligamiento

19. Metodo del juego • Comezar con un LOD alto para tener mas grupos de ligamiento que cromosomas • Calcular los mapas y tratar de agrupar los marcadores a LOD’s mas bajos • Si un grupo consiste en loci de varios cromosomas veremos ligamientos sospechosos y un mal ajuste de los datos

20. Tree view • Calcular (F9) • Experimentar • Revisar los nodos • Especie: Arabidopsis • Cuantos cromosomas?

21. Nodos Analisis simple: Solo un nodo con LOD 2: Con LOD 2 todos los loci estan ligados Con LOD 3 hay 4 nodos Los 3 ultimos estan colapsados: Los loci Permanecen ligados hasta LOD 10 El primer nodo, se abre con LOD 4 cada una de las cuales no se abre sino hasta LOD9

22. Space bar o Click derecho

23. Population/Create groups for mapping

24. Seleccionar Tabs vacios Re-calcular

25. Cero

26. Vacio No hay razon para dudar del genotipaje Hacer el mapa

29. Proceso de cartografia: session log • El procedimiento de cartografia es basicamente un proceso de construccion que añade los loci de uno en uno, comenzando por los loci mas informativos. Para cada locus que se añade se busca la mejor posicion y se calcula la bondad de ajuste. Cuando el ajuste se reduce muy abruptamente (jump muy grande) o cuando el locus da lugar a distancias negativas el locus es removido • Esto continua hasta que todos los loci hayan sido usados una vez. Este es el final de lo que se conoce como first round.

30. Subsecuentemente se trata de añadir todos los loci previamente removidos . Algunos pueden entrar exitosamente ya que el mapa contendra mas loci que en el primer intento. Pero podrian no entrar de nuevo debido a “jumps” muy grandes o distancias negativas . Este es el second round. • Despues, se trata de incluir todos los loci removidos ignorando los requerimientos de maxima reduccion del ajuste y distancias negativas permitidos. Esto resulta en un third round o round final. • Obviamente cuando todos los loci entran en el mapa en el primer o segundo round se omite el tercero. Los resultados de cada round se representan en cada nodo.

31. En el procedimiento cada mapa es calculado usando los datos de los loci de par en par . Solo aquellos que tienen una frecuencia de recombinacion mas pequeña que el limite REC señalado (0.4 default) y un LOD mayor que el limite (1.0 default). • Cambiar estos limites (thresholds) a valores mas severos (menor REC, mayor LOD) resulta en eliminar datos de los calculos. • Despues de añadir un locus al mapa, se usa mas informacion que previamente para la estimacion de las distancias para las que este locus provee informacion. • Asi añadir un locus puede influenciar el orden optimo y para prevenir quedar atrapados en un ajuste especifico (goodness-of-fit) se realiza una accion que se llama ripple cada vez que se añade un locus. En un ripple todas las permutaciones de los 3 marcadores adjacentes son consideradas; para cada orden se calcula el mapa y el ajuste correspondiente y el mejor orden es escogido para continuar.

32. Ir a Los resultados despues del primer round. La hoja de loci contiene loci que tienen Asignado grupo 0. estos loci fueron removidos Diurante el primer round. No aparecen en el mapa, ni en el dibujo, ni en el texto

33. Mirar que las segregaciones Son parecidas cuando pasamos de un locus a otro. Logico: porque? Mirar el locus er Su contribucion a la bondad De ajuste es muy alta Indicacion que el ocus no Calza muy bien en esa Posicion.

34. El segundo mapa es igual al primero Comparar los mapas del 1er y 3er round Se puede crear una carta combinada ou can create a combined chart: Click derecho en "Map 1" y en "Map 3“ “Join” esta disponible. Usar “Combine maps”

36. 2 3 1 Cartografiar nuevamante recalcular Pueden ver que pasa si quitamos El locus 2 de los datos: ir al “ group node” excluir locus 2 del panel Loci click en Calculate Map.

37. Aparece un nuevo nodo Solo se necesito un round

38. Ejercicio: Repetir usando Los defaults Y usando Haldane Load 2 files .loc de datos Simulados de backcross y F2, Con2 grupos de Ligamiento Y 22 loci:

39. Ver pag 28 y 29 del tutorial • usar Load Data function del menu File • seleccionar BC1.loc (in the DemoData directory) u click Open • usar la funcion Load Data • seleccionar el file F2.loc y click Open • verificar que hay varios loci en la F2 que estan registrados en modo dominancia (con c 's y d 's) • en el LOD groupings (tree) tabsheet, presionar F9 y seleccionar los 2 nodos con LOD 2.0 para mapar • Calcular el mapa para el grupo 2 • repetir para el BC.