1 / 24

PRAKTIKUM č.2

PRAKTIKUM č.2. ÚKIA, LF MU, Mgr. Olga TICHÁ. PROTILÁTKY. protilátky jako základní reagens při imunologických metodách základní charakteristika reakce Ag – Ab. Obecné principy reakce Ag - Ab.

fran
Télécharger la présentation

PRAKTIKUM č.2

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. PRAKTIKUM č.2 ÚKIA, LF MU, Mgr. Olga TICHÁ

  2. PROTILÁTKY protilátky jako základní reagens při imunologických metodách základní charakteristika reakce Ag – Ab

  3. Obecné principy reakce Ag - Ab Antigen– látka schopná vyvolat imunitní reakcivazebné místo: EPITOP (antigenní determinanta)Protilátkavazebné místo: PARATOPAFINITA(epitop s paratopem) a AVIDITA nativní rekombinantní monoklonální polyklonální

  4. PROTILÁTKY (Ab) Fab Fc

  5. Rozeznání Fc Ab makrofágem

  6. TŘÍDA PROTILÁTEK • dle typu konstantního řetězce

  7. Interakce volného Ag s volnými Ab

  8. AFINITA • vazba Ag-Ab zahrnuje vodíkové můstky, iontové vazby, hydrofóbní interakce, van der Waalsovy síly • dána velikostí síly mezi jedním vazebným místem Ab a jedním epitopem Ag

  9. AVIDITA • dána vícenásobnou interakcí mezi multivalentní Ab a Ag (opakovaný epitop na povrchu)

  10. POZOR! Antigenem může být i protilátka!!!

  11. PŘÍPRAVA MONOKLONÁLNÍCH PROTILÁTEK I.

  12. MAb II.

  13. MAb III.

  14. MAb IV.

  15. PEG

  16. MAb POUŽÍVANÉ K TERAPII • Myší (celé) -momab • Chimérické (myší VH VL ) -ximab • Humanizované (myší hypervar.úseky) -zumab • Lidské (připravené technikami mol.biol. dle knihoven)

  17. Příklady klinického využití monoklonálních protilátek v léčbě imunopatologických chorob • Imunosuprese: • - anti-CD3 (OKT3), • anti CD25 (basiliximab, daclizumab), • anti CD20 (rituximab) • Blokáda prozánětlivých cytokinů: • Anti –TNF-a (infliximab, adalimumab) – revmatoidní artritida, Crohnova choroba, • Blokáda adhezivních molekul: • anti integrin a4b1 (natalizumab) – roztroušená mozkomíšní skleróza • Anti-CD11a (efalizumab) - psoriáza • Protialergická léčba • anti-IgE (omalizumab): těžké formy astmatu

  18. Monoklonální protilátky v humánní medicíně • Transplantologie • Muronomab-CD3 , Basiliximab (IL2r alfa, chim.), • Daclizumab (IL2r alfa, hum.) • Kardiologie • Abciximab (glykoprotein IIb a IIIa trombocytů, chim.) • Revmatologie • Infliximab (TNFalfa, chim.) Adalimumab (TNFalfa, lidská) • Gastroenterologie • Infliximab (TNFalfa, chim.) • Infekční lékařství • Palivizumab (F-protein RSV, hum.) • Neurologie • Natalizumab (inhibitor adhesivní molekuly a4 b1) - SM

  19. Monoklonální protilátky v humánní medicíně • Onkologie • Trastuzumab (HER2 onkoprotein, hum.), ca mammae • Cetuximab (epithelial growth factor receptor EGFR1, • chim.), Edrecolomab (epithelial cell adhesion molecule, • myší) kolorektální ca • Hematoonkologie • Rituximab (CD20 na B-lymfocytech, chim.) nehodgkinský lymfom, CLL • Alemtuzumab (CD52 na B,T,NK,mono, hum.) CLL • Alergologie • Omalizumab (humanisovaná anti IgE)

  20. Produkce antigenů a protilátek v transgenních rostlinách • Rekombinantní protilátky • SIgA/G Streptococcus mutans (tabák) • IgG HSV2glykoprotein B ( sója) • scFv-bryodin 1 imunotoxin CD40 • (tabák,bun.susp.) • Rekombinantní podjednotkové vakcíny • HBsAg (tabák) • Glykoprotein viru vztekliny (rajče) • Termolabilní enterotoxin E.coli (tabák, brambory) • Virus prasečí gastroenteritidy (tabák, kukuřice) • (Ma KCJ et al.: Nature Rev Genetics 2003; 4: 794-805)

  21. CVIČENÍ Č.1 • Úkol č.1: ředění geometrickou řadou (sloupce 1,2) • Úkol č.2: pipetování do mikrotitrační destičky (sloupce 3-11)

  22. sl. 1 sl. 2 A A ŘED.R. ŘED.R. B B destil.voda 600 ml ŘED.R. ŘED.R. 600 ml 600 ml 600 ml 600 ml 600 ml C C 600ml 600 ml 600 ml 600 ml 1:2 1:2 600 ml ŘEDÍCÍHO ROZTOKU 1 2 3 4 5 D D 1:1 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:4 1:4 E E 1:8 1:8 F F 1:16 1:16 G G 1:32 1:32 H H H2O H2O Geometrická řada Do jamky vždy jen 100ul z naředěné geom. řady. Zbytek destičky dopipetovat ředícím roztokem: sl. 3-5 - dopipetovat 8-kanálovou pipetou sl. 6-8 – dopipetovat opakovací pipetou (=stepper) sl. 9-11 - dopipetovat 1-kanálovou pipetou

  23. PROTOKOLY v hlavičce:jménodatumúloha č.název úlohy v protokolu samotném:PrincipPostupVýsledkyZávěr …grafy…

  24. PROTOKOL Č.1 • Princip: Okomentovat význam správného pipetování • Postup: pomůcky, schémátko • Do výsledků: min. hodnota, max. hodnota, průměr, směrodatnou odchylku jen u absorbancí nenáležejících ke geometrické řadě (sl.3-11)

More Related