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Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune :

Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques. Castets Marie-Dorothée. Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger. Domestication de nouvelles espèces. Approche générique.

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  1. Étude de la qualité des ovocytes de la perche commune : utilisation de critères morphométriques et de nouvelles approches protéomiques Castets Marie-Dorothée Encadrants: Pascal Fontaine, Jean-Noël Gardeur, Bérénice Schaerlinger

  2. Domestication de nouvelles espèces Approche générique Maîtrise du cycle de vie Géniteurs Perca fluviatilis Ovocytes Larves Spermatozoïdes Œufs Modification des performances de reproduction Besoin d’indicateurs de qualité – morphométriques/moléculaires 1

  3. 1. Protocole expérimental Ovocytes fécondés Mise au point du protocole Ovocytes non fécondés Incubation (laboratoire) F. Silvestre, Namur Congélation Suivi : mesure des caractéristiques Base de données œufs/paramètres Classification des œufs / qualité (ACP-CAH) Analyse protéomique Protéines d’intérêt ? Collecte d’ovocytes Site expérimental de La Bouzule 2

  4. jc OD 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes l • Géniteurspoids, date de ponte • Ovocytesdiamètre et poids ovocytaire, • fragmentation des pontes • Œufs fécondés Taux de fécondation à 3 jours, • Durée d’incubation, Durée d’éclosion, Taux d’éclosion • Larves Taux de malformation larvaire, Taille des larves à l’éclosion, • Taux de survie à 7 jours, Taux de résistance au jeûne 3

  5. Axe 1 0.8 Axe 2 Fragmentation rate Survival rate after 7 days Hatching duration 0.4 Axe 3 Oocyte diameter Egg weight Axis 2 Variables non impliquées dans des axes 0 Female weight Malformation rate Incubation duration -0.4 Larval size at hatching Fertilization rate Hatching rate Spawning date -0.8 -0.4 - 0.8 0 0.4 0.8 Axis 1 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats :Analyse en Composantes Principales – Cercle des corrélations Taux de survie larvaire à 7 jours Taux de résistance au jeûne Taux de fécondation Taux d’éclosion Starvation tolerance Taux de malformation larvaire Variables actives Variables illustratives 4

  6. 16-3 21-2 2.25 15-3 16-2 15-2 1.50 34-1 Classe A 21-3 15-1 16-1 6-3 Frr 22-1 37-2 28-1 0.75 Id s7d Axis 2 Od 22-3 Sf Ew 21-1 6-1 22-2 34-3 27-1 6-2 0 35-2 Sw 35-1 42-2 36-2 Mr 28-3 34-2 Hd 42-3 Lz -0.75 Classe B Fer Hr 35-3 39-1 25-2 Sm 37-3 25-1 27-3 37-1 36-1 42-1 28-2 36-3 -1.50 27-2 39-2 Axis 1 1 -3 -1 0 2 -2 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats :ACP + CAH – Classification des pontes 5

  7. Ajout d’1 catégorie de pontes sans aucune fécondation 5 à 6 pontes de chaque classe sélectionnée pour une étude protéomique 2. Détermination morphométrique de la qualité des ovocytes Résultats :Caractéristiques des classes Mise en évidence de 2 catégories de pontes selon l’ACP Classe C Non Fécondées 6

  8. Std. interne Ech. 1 Electrophorèse 2D Ech. 2 Std. interne Ech. 3 Ech. 4 3. Etude protéomique des ovocytes Technologie 2D-DIGE :Principe Std. interne 27.5µg Ech. 2 Ech. 1 25µg 25µg Std. interne 27.5µg Ech. 4 Ech. 3 25µg 25µg 7

  9. 90 367 80 482 70 715 701 707 60 1032 1029 50 1334 1406 1469 1463 40 Mr (kDal) 1472 1660 1681 1610 1717 1742 1683 1792 30 1953 1969 2137 2252 34 spots dont l’expression varie selon les groupes de pontes 2325 20 2399 2447 2454 2474 7 4 5 6 2708 pI (pH units) 2782 2835 2875 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats :spots d’intérêt (variation d’abondance intergroupe – p<0.05) 8

  10. BQ MQ NF A B C D BQ QM NF 4 groupes : Qualité Moyenne Non Fécondés + Groupe A Groupe B Groupe C Groupe D Bonne Qualité 3. Etude protéomique des ovocytes Résultats :Classification spots/oocytes 1 2 1-1 1-2 1660 1717 2474 2454 1742 2325 1792 2270 2708 2782 2835 2875 2137 367 2399 707 482 1681 701 715 1406 1610 1683 1441 1463 1029 1469 1472 1953 2447 1032 1334 1969 2252 -0.2 0 0.2 34 36 28 37 39 41 35 40 20 33 26 6 22 21 25 38 Bonne Qualité Non Fécondés Qualité Moyenne 9

  11. 3. Etude protéomique des ovocytes QM NF BQ - Classification des fonctions biologiques Inhibition de l’expression Groupe A Activation de l’expression Groupe B Groupe D Groupe C QM NF BQ NF 10 Résultats :Identification des spots par spectrométrie de masse MS/MS - 19 spots identifiés / 34

  12. 3. Etude protéomique des ovocytes Groupe A Groupe B Biomarqueurs potentiels de qualité Perspectives :Protéines/fonctions potentiellement intéressantes Protéines du Stress Protéines chaperonnes + protection des protéines lors d’un stress Ovocytes Non Fécondés Protéines du Stress oxydatif Protection cellulaire contre les espèces réactives de l’oxygène Ovocytes Qualité Moyenne 11

  13. Remerciements : • Equipes de l’Université de Notre Dame de la Paix (Namur) : • Frédéric Silvestre, Patric Kestemont, URBO • Edouard Delaive, Marc Dieu, URBC Equipe de l’UR.AFPA : -Yannick Ledoré, Alain Iuretig, Awatef Trabelsi, Kevin Debes Merci de votre attention. 12

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