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LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS

LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS. AGUIRRE VIDAL IXCHEL BOBADILLA MALDONADO JONATAN PIÑA RAMÍREZ LUIS EDUARDO ROSAS CARRERA ANA ELENA VEGA REZA KAREN ARIADNA. INTRODUCCIÓN. El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiológico.

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LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS

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  1. LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS AGUIRRE VIDAL IXCHEL BOBADILLA MALDONADO JONATAN PIÑA RAMÍREZ LUIS EDUARDO ROSAS CARRERA ANA ELENA VEGA REZA KAREN ARIADNA

  2. INTRODUCCIÓN • El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiológico. • Las enfermedades por bacterias son frecuentes por lo tanto sus estudios son los más usados. • Metodología de la toma de la muestra. • Se usa desde la tinción hasta la genotipificación. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  3. TINCIONES • La más utilizada es la tinción de Gram • Ziehl- Neelsen y Kinyoun (carbol fucsina) • Carbol glicerol, permanganato de potasio→ se necesita microscopio de luz ultravioleta. • Tinta china→ hongos (Cryptococcus neoformans) • Hidróxido de potasio→ hongos en uñas y cabello. • Blanco de Calcoflúor→ polisacáridos de la pared de hongos filamentosos y levaduriformes. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  4. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  5. Histopatología. Esférula con endosporas. Tinción calcofluor. De: Mercy Hosp Toledo OH/Brian J. Harrington Dermatofitos, tinción de hidróxido de potasio criptosporidiosis, Tinción de Kinyoun Mycobacterias, Tinción de Ziehl- Neelsen Histopatología. Esférula con endosporas. Tinción calcofluor. De: Mercy Hosp Toledo OH/Brian J. Harrington Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  6. PRUEBAS RÁPIDAS PARA LA DETECCIÓN DE ANTICUERPOS Y ANTÍGENOS

  7. GENERALIDADES Kumate-Gutiérrez. El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Infectología clínica 17ª edición, 2008.

  8. CONTRAINMUNOELECTROFORESIS Kumate-Gutiérrez. El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Infectología clínica 17ª edición, 2008.

  9. AGLUTINACIÓN Y COAGLUTINACIÓN CON LÁTEX Kumate-Gutiérrez. El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Infectología clínica 17ª edición, 2008.

  10. ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO (ELISA) Kumate-Gutiérrez. El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Infectología clínica 17ª edición, 2008.

  11. ENSAYO INMUNOENZIMÁTICO (ELISA) Kumate-Gutiérrez. El laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. Infectología clínica 17ª edición, 2008.

  12. INMUNOFLUORESCENCIA La inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcación que hace uso de anticuerpos unidos químicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molécula, en un microorganismo o tejido. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf

  13. TÉCNICA Unión Molécula fluorescente a un anticuerpo. Isotiocianato de fluoresceína. El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado biológico REACCIÓN DE POSITIVA: Exposición de la muestra a una fuente de luz de onda corta (ultravioleta o azul) seleccionada. Acoplamiento de Ag-Ac produciendo una fluorescencia. La luz emitida puede ser cuantificada con facilidad por microscopia de fluorescencia en preparados histológicos Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas. www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf

  14. INMUNOFLUORESCENCIA puede ser utilizada en cortes de tejidos, líneas celulares cultivadas, células individuales y secreciones con la finalidad de analizar la presencia y distribución de proteínas, glúcidos y moléculas sobre el tejido. CLÍNICA: ETS, influenza, dengue, etc. INVESTIGACIÓN UTILIDADES: VENTAJAS 
 - Se pueden obtener resultados rápidos. -No es necesario realizar cultivos. -Se puede identificar microorganismos específicos en un grupo mixto. -Determina la identidad de un organismo muerto. DESVENTAJAS 
 -Costos en reactivo y equipo -Debe ser realizado por personal muy especializado. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas, www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf

  15. INMUNOFLUORESCENCIA INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: Esta se vale de un Ac primario marcado con un fluorocromo( fluresceína), que reacciona con el antígeno dentro de la muestra. El anticuerpo reconoce la molécula diana y se une a ella directamente. Ventajas: Es rápida. Poca sensibilidad. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  16. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  17. INMUNOFLUORESCENCIA INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Hace uso de dos anticuerpos; el anticuerpo primario es el que reconoce y se une a al molécula diana, mientras que el secundario que es el que se encuentra marcado con el fluoróforo, reconoce al primario y se une a él. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  18. Kumate- Gtz, Infectología clínica, 17ma edición, Méndez Editores, México, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnóstico de enfermedades infecciosas

  19. BIOMETRÍA HEMÁTICA

  20. BIOMETRÍA HEMÁTICA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  21. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  22. Leucocitos Leucopenia > 4 000/ɥL CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  23. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  24. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  25. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  26. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  27. CITOMETRÍA HEMÁTICA: SERIE BLANCA RUÍZ ARGÜELLES G – RUIZ REYES G. INTERPRETACIÓN DE LA CITOMETRÍA HEMÁTICA. ÍNDICES Y PARÁMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGÍA 3ª e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.

  28. CULTIVOS

  29. Es el proceso de crecimiento de m.o. mediante la toma de bacterias de un sitio de infección por método de recolección de muestra y crecimiento en un medio ambiente artificial.

  30. TOMA DE MUESTRA

  31. HEMOCULTIVOS

  32. CULTIVO DE LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO

  33. UROCULTIVO

  34. Muestra tomada con hisopos estériles e inocularse en medios de transporte semisólidos (Stuart) CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO

  35. Mantener la muestra tan próxima a su estado original como sea posible, con deterior mínimo, y minimizando el riesgo que afrontan quienes transportan la muestra, mediante el uso de recipientes herméticamente cerrados. TRANSPORTE DE MUESTRAS

  36. PREPARACIÓN DE MEDIOS ARTIFICIALES

  37. De acuerdo con su función y uso. Hay 3 categorías generales de medios: CLASIFICACIÓN

  38. MEDIOS DE CULTIVO ARTIFICIALES

  39. Especies de Micrococcus • MEDIOS DE CULTIVOS DE ELECCIÓN.- • Agar sangre o Agar chocolate • Cultico selectivo: Agar manitol (halo amarillo) • Incubación a 35° C x 24-48 hr. • COLONIAS • S AUREUS: Medianas-grandes, elevadas, traslucidas; con pigmento amarillo, la mayoría betahemolíticas COCOS GRAMPOSITIVOS CATALASA POSITIVOS

  40. S. Betahemolítico (pyogenes) • S. Pneumoniae • S. Viridans • Enterococos • ( faecalis y fecium • MEDIOS DE CULTIVO.- • Agar sangre de oveja al 5% y agar chocolate • Betahemolisis, es mejor en condiciones anaeróbicas • Período de incubación 48 hr • ASPECTO COLONIAS.- • Translucida a opacas; planas, brillantes, ancho estrecho de betahemólisis COCOS GRAMPOSITIVOS CATALASA-NEGATIVOS

  41. Moraxellacatarrhalis • N. gonorrhoeae • N meningitides • MEDIO DE ELECCIÓN • Agar sangre de carnero al 5% • Agar chocolate • Medios selectivos: Thayer Martin (agar chocolate + suplemento y antimicrobianos colistina, nistatina y vancomicina) • Incubación a 35-37° C x 72 horas • En una atmosfera húmeda enriquecida en CO2 • ASPECTO DE LAS COLONIAS • MC: Grande, no pigmentada o gris, opaca, lisa; consistencia friable • NG: Pequeñas, blanco-grisaceas, convexas, translúcidas, brillantes. COCOS GRAMNEGATIVOS

  42. Corynebaterium: • Amycolatum • Auris • diphteriae • Listeria monocytogenes MEDIOS DE CULTIVO Agar sangre de carnero al 5% Agar chocolate NO agar MacConkey Incubación a 35°C en 48 hr.-3 días Color negro gris BACILOS GRAMPOSITIVOS

  43. Burkholderiapseudomallei • Burkholderiacepacia • Pseudomonaaeruginosa • P. alcaligenes • P. fluorescens • P. luteola • MEDIOS DE CULTIVO • Agar sangre de oveja al 5% • Agar chocolate • Agar MacConkey, caldos de los sistemas de hemocultivo • Incubación a 35° C en CO2 o aire atmosférico x 24-48 horas >siembra • COLONIAS.- Esparcidas, planas y con bordes dentados , brillo metálico, colonias betahemolíticas, pigmentación verde azulada BACILOS Y COCOBACILOS GRAMNEGATIVOS

  44. Brucellaabortus • Brcellameltensis • B. canis • B. suis • Bacilos cortos o cocobacilos gramnegativos, inmóviles y aerobios; requieren CO2 • MEDIOS DE CULTIVO • Sistemas comerciales para hemocultivo (BACTEC, lisis-centrifugación) • Incubación prolongada x 30 días • Atmosfera humidificada con CO2 al 5-10% • ASPECTO COLONIAS.- • Pequeñas, convexas, lisas, traslúcidas no hemolíticas, amarillo pálido BRUCELLA

  45. Bacilos inmóviles muy delgados Ácido-alcohol resistentes MEDIO DE CULTIVO.- Se requiere la combinación de medios de cultivo sólidos líquidos SOLIDOS: Lowenstein-Jensen. 35° C en la obscuridad con una atmosfera con 5-10% de CO2 y humedad elevada x 3-6 semanas Agar chocolate LÍQUIDOS: BACTEC. Atmosfera 5-10% de CO2 x 1º días MICOBACTERIUM

  46. LA BIOLOGÍA MOLECULAR EN EL DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO

  47. INMUNOFLUORESCENCIA

  48. Introducción • Costoso • Mucho tiempo • No siempre se pueden aislar los microorganismos Genotipo Dx microoganismos de difícil cultivo Mycobacterias y Legionella ID secuencias de DNA

  49. Dx. Biología Molecular • Análisis de DAN o RNA • Detección de segmentos dentro de otros no específicos • Enzimas de restricción • DNA varios millones fragmentos • RNA 1/1000 • Electroforesis en gel • Hibridación con sonda para ID mol. interés

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