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I. López-Hernández Departamento de Microbiología Facultad de Medicina. Universidad de Sevilla

Estudio de la sensibilidad antimicrobiana: definición, metodología y criterios internacionales de interpretación. I. López-Hernández Departamento de Microbiología Facultad de Medicina. Universidad de Sevilla. ANTIBIOGRAMA Microorganismo-----Antimicrobiano. Microorganismo-----Antimicrobiano

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Presentation Transcript

  1. Estudio de la sensibilidad antimicrobiana: definición, metodología y criterios internacionales de interpretación I. López-Hernández Departamento de Microbiología Facultad de Medicina. Universidad de Sevilla

  2. ANTIBIOGRAMA Microorganismo-----Antimicrobiano

  3. Microorganismo-----Antimicrobiano • CATEGORÍAS CLÍNICAS • SENSIBLE • INTERMEDIO • RESISTENTE

  4. OBJETIVOS • Antibioterapia empírica • Antibioterapia dirigida • Detección de mecanismos de resistencia • Mapas de resistencia

  5. SELECCION DE ANTIMICROBIANOS Interés clínico Lectura interpretada de antibiograma Vigilancia epidemiológica de resistencia

  6. CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACION • CLSI Clinical and LaboratoryStandardsInstitute • EUCAST European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing • SFM SocieteFrançaise De Microbiologie • COESANTComité Español del Antibiograma

  7. CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACION

  8. CRITERIOS INTERNACIONALES DE INTERPRETACION

  9. METODOLOGIA • Métodos estandarizados • Cepas control • ATCC (American Type Culture Collection)

  10. METODOLOGIA

  11. METODOLOGIA • METODOS DE DIFUSION EN AGAR • Difusión con disco • Epsilon test (E test) • METODOS DE DILUCIÓN • Dilución en agar • Dilución en caldo

  12. DIFUSION Difusión con disco

  13. DIFUSION Difusión con disco • Inóculo: Escala McFarland 0.5

  14. DIFUSION Difusión con disco • Inóculo: Escala McFarland 0.5 • Siembra uniforme en medio sólido

  15. DIFUSION Difusión con disco • Inóculo: Escala McFarland 0.5 • Siembra uniforme en medio sólido • Colocación discos de antibióticos (evitar superposición)

  16. DIFUSION Difusión con disco • Inóculo: Escala McFarland 0.5 • Siembra uniforme en medio sólido • Colocación discos de antibióticos (evitar superposición) • Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

  17. DIFUSION Difusión con disco Lectura de resultados: Medir diámetro del halo de inhibición

  18. DIFUSION Difusión con disco Interpretación de resultados CUALITATIVO

  19. DIFUSION Difusión con disco • VENTAJAS • Fácil • Rápido • Barato • INCONVENIENTES • Método cualitativo

  20. DIFUSION E test (Epsilon test)

  21. DIFUSION E test (Epsilon test) Gradiente exponencial de las concentraciones de antimicrobianos

  22. DIFUSION E test (Epsilon test) • Inóculo: Escala McFarland 0.5 • Siembra uniforme en medio sólido • Colocación tiras (orientación tira) • Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

  23. DIFUSION E test (Epsilon test) Lectura de resultados

  24. DIFUSION E test (Epsilon test) Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

  25. DIFUSION E test (Epsilon test) • VENTAJAS • Fácil • Rápido • Cuantitativo • INCONVENIENTES • Coste

  26. DILUCION Dilución en caldo

  27. DILUCION Dilución en caldo • Solución de antibiótico • Inóculo: Escala McFarland 0.5 Dilución 1:100 • Macrodilución/Microdilución • Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

  28. DILUCION Dilución en caldo Lectura macrodilución Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

  29. DILUCION Dilución en caldo Lectura microdilución Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

  30. DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

  31. DILUCION Dilución en caldo Sistemas semiautomatizados

  32. DILUCION Dilución en caldo • VENTAJAS • Cuantitativo • INCONVENIENTES • Coste • Laborioso

  33. DILUCION Dilución en agar

  34. DILUCION Dilución en agar • Preparación de placas con antibióticos • Replicador (múltiples microorganismos) • Inóculo Escala McFarland 0.5 Dilución 1:10 • Incubación 18-24h, atmósfera adecuada

  35. DILUCION Dilución en agar Lectura dilución en agar: crecimiento Interpretación de resultados CUANTITATIVO (CMI)

  36. DILUCION Dilución en agar • VENTAJAS • Cuantitativo • INCONVENIENTES • Complejo • Coste

  37. METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida • CONCENTRACION MINIMA BACTERICIDA (CMB) • CURVAS DE LETALIDAD • ACTIVIDAD BACTERICIDA DEL SUERO • Uso en investigación • No existen técnicas normalizadas • Baja reproducibilidad • Fase de crecimiento del inóculo • Dificultades con microorganismos exigentes

  38. METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 1. Concentración mínima bactericida

  39. METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 2. Curvas de letalidad Método cinético de determinación del poder bactericida

  40. METODOS ESPECIALES A. Capacidad bactericida 3. Actividad bactericida del suero

  41. METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos • METODO DE TABLERO (CHECKERBOARD) • CURVAS DE LETALIDAD • DIFUSION-DISCO (DISCOS DE APROXIMACION) EFECTOS DE COMBINACION Indiferencia Adición Sinergia Antagonismo

  42. METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 1. Tablero (Checkerboardassay)

  43. METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 2. Curvas de letalidad

  44. METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 3. Difusión

  45. METODOS ESPECIALES B. Actividad combinada de antimicrobianos 3. Difusión D-test. Fenotipo Eritro R/Clinda S

  46. METODOS ESPECIALES C. Detección de mecanismos de resistencia PRUEBAS DE SENSIBILIDAD Técnicas de cultivo Técnicas moleculares Difusión disco E test Dilución en caldo Dilución en agar PCR

  47. METODOS ESPECIALES Detección de mecanismos de resistencia

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