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Explore techniques for filtering challenging fermentation liquids with a focus on liquid-liquid separation, organelle separation, and molecule weight determination. Learn about DNA semi-conservative replication and different centrifugation techniques like tubular, disc-stack, and more. Understand the principles, classifications, and applications of varied centrifugation technologies.
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Questions 1 过滤技术难处理的发酵液如何处理 • 液液分离,并含少量固体颗粒 • 细胞器的分离 • 大分子物质分子量的测定 • DNA半保留复制
第四章 离心分离 1 4.1 概论 4.2 离心分离原理 4.3 离心技术分类 4.4 管式离心机 4.5 多室离心机(管式离心机的变形) 4.6 碟式离心机 4.7 螺旋卸料沉降离心机 4.8 离心过滤 4.9 离心设备的选择 4.10 超速离心技术
4.2 离心分离原理 离心力: Stock’s Force(粘滞吃力): 离心沉降速度: 分离因子定义Fr:离心力/重力加速度(g)的比值 意义:衡量离心设备的离心程度的重要技术参数,用于离心机的分类
4.3 离心技术分类 按分离因子Fr分类 1)、常速离心机Fr < 3,000g 三足沉降式: 500-1000g 螺旋卸料式:1200-3000g 2)、中速离心机,Fr = 3,000 — 5,000g 多室离心机:2000-8000g 碟片式离心机:3000-10000g 3)、高速离心机,Fr = 5,000 — 20,000g 多室离心机:2000-8000g 碟片式离心机:3000-10000g 管式离心机:>8000-15000g 4)、超速离心机,Fr = 20,000 — 1,000,000g
4.3 离心技术分类 用途分类 1)、分析性:超速离心机 2)、制备性:A、实验室用;B、工业用 工业应用分类 1)、管式离心机 2)、多室离心机(管式离心机的变形) 3)、碟式离心机:A、人工排渣式, B、喷嘴排渣式, C、活塞排渣式 4)、螺旋卸料沉降离心机 5)、离心过滤 6)、三足式离心机
4.4 管式离心机 操作: 应用:A、液-液分离(连续式),B、低固体含量(<1%)的固-液分离(间歇式)。 主要技术指标:A、离心管直径40-150mm,长径比4-8;B、离心强度8000—15000g;C、处理能力100-400 L/h;D、适应的颗粒直径0.01-100m,固液密度差大于0.01g/cm3,固体含量小于1% 优点:A、结构简单,价廉,B、分离效果好,分离因子高8000—15000g 缺点:A、处理能力有限; B、低固体含量的悬浮液(<1%)
4.4 管式离心机 沉降计算 粒子在Z-axis 上的移动速度: 粒子在r-axis 上的移动速度: 粒子的运动轨迹:
4.4 管式离心机 清除条件:最难分离的粒子在入口:Z=0,r=R1; 在出口:Z=H, r =R0。按进入和离开的边界条件,将上式积分得: 在大多数条件下,由于液层很薄,R0 Rl,上式可简化为: 意义:A、最大流量Qmax与离心机特征(H, R0, Rl, )的关系,超过最大流量,粒子不能被清除;B、离心机设计、放大和操作的基础。
4.5 多室离心机(管式离心机的变形) 操作: 应用:A、抗生素的液-液萃取分离,B、固相浓度小于5%的固—液分离,如酒类和果汁的澄清。 主要技术参数:A、3-7个分离室,B、分离因子2000-8000g,C、处理能力2.5-10 m3/h,D、颗粒d >0.1m,E、固体浓度<5%。 优点(与管式比较):A、加强功能:分离液流程、沉降面积、流层减薄、沉降距离减小;B、颗粒的筛分作用:粗颗粒沉降到内层分离室,细颗粒沉降到外层分离室. 缺点:沉淀清理困难。
4.6 碟式离心机 化学、制药和生化工业应用最广泛 特点: A、10-100个锥顶角为60-100C的锥形碟片; B、碟片距很短0.5-2.5mm,沉降距离极短,分离效果高; C、碟片多,沉降面积大,增加分离效果; D、抗对流效果高。 分类: A、人工排渣式; B、喷嘴排渣式; C、活塞排渣式。
A、人工排渣碟片离心机 操作: 应用:A、液-液分离,并含少量固体,B、固-液分离,固相含量小于2%,C、澄清操作。 主要技术指标:A、分离因子10000g以上;B、适应的颗粒直径0.02—20m,固体含量小于2%,C、< 100t/h。 优点:A、分离因子达10000g以上,B、特别适合于含少量细颗粒的液液分离。 缺点:A、转鼓与碟片之间空隙大,不易发挥离心机的高效分离性能;B、停车清洗,生产效率低,劳动强度大。
B、喷嘴排渣碟片离心机 操作: 应用:多用于cell浓缩,浓缩比在5-20。 主要技术指标:A、分离因子5000g左右;B、适应的颗粒直径0.1-100m,固体含量<25%,C、喷嘴2-24个,D、转鼓d< 900mm 优点:A、颗粒富积好,B、处理量大,可达300t/h。 缺点:A、分离因子5000g,低,不适合于小颗粒的分离;B、富积的颗粒含水量大。
C、活塞排渣碟片离心机 操作: 应用:多种颗粒的分离(0.1--500m颗粒),固体含量<10%, 应用范围最广 主要技术指标:A、分离因子5000-9000g;B、适应的颗粒直径0.1—500m,固体含量<10%,C、处理量达40t/h,D、固液密度差0.01g/cm3。 优点:A、颗粒富积好,B、处理量较大40t/h。 缺点:A、富积的颗粒含水量大;B、不适合于高固体含量的发酵液(>10%)。
4.6 碟式离心机 最大流量计算
4.7 螺旋卸料沉降离心 操作:立式,卧式 应用:A、高浓度的大颗粒的固液分离(达50%, 2um-5mm),如淀粉精制和污水处理。 主要技术指标:A、分离因子小于6000g;B、适应的颗粒直径2um-5mm,固体含量1-50%,C、固液密度差0.05g/cm3,D、转鼓直径--900mm。 优点:A、操作温度高300C大;B、处理量大,可达60t/h。 缺点:分离因子小于6000g,不适合于小颗粒的分离。
4.7 螺旋卸料沉降离心机 沉降计算:
4.8 离心过滤 原理:
4.8 离心过滤 计算 流量方程: 注:流量为非常数,时间增加, 滤饼厚度增加,而流量减小。 滤饼形成时间方程: 意义:得到滤饼厚度(R0-RC)所需时间,用于工艺放大 Q
4.9 离心设备的选择 基本参数 选择 颗粒d,固液差,基本型号 固体物浓度 亚型 产物热稳定性 低温离心 流量Q, 规模 规格、台数 气溶胶,活cell 密封灭菌设计
4.1 概论 固液分离:第一选择为过滤,第二选择离心分离。 应用: A、难过滤的发酵液:d小、大、过滤U慢、甚至不能过滤的悬浮液,以及忌用助滤剂、或助滤剂无效的悬浮液; B、其他难分离的固液分离; C、互不相溶液—液分离,如液液萃取; D、不同密度固体或乳浊液的密度梯度分离,如超离心分离 缺点: A、分离得到的不是滤饼一样的半干物,而是浆状物; B、处理量小; C、设备复杂,价格贵,分离成本高。 操作形式: A、离心沉降;B、离心过滤;C、密度梯度(超离心)。
4.10 超速离心技术 超速离心机:分离因子在100,000g以上的离心设备 沉降系数(sedimentation coefficient, S = Svedbergs = 10-13 s): S计算: 颗粒在20C 水中的Sw,20为 v为溶质(颗粒)的单位质量的体积, w,20和 L,T分别为20 C 的水和TC 溶剂的黏度,w,20和L,T分别为20 C 的水和TC 溶剂的密度。 Sw,20与溶质(颗粒)浓度有关: 为c0时的沉降系数(20 C 的水), k为常数
4.10 超速离心技术1 操 作 模 式
4.10 超速离心技术-应用 A. 测定分子量: B. 大分子的纯度鉴定 C. 大分子的构相变化 D. DNA半保留复制