1. Gen�tica molecular dos sistemas eritrocit�rios: import�ncia na pr�tica cl�nica

2. Os sistemas eritrocit�rios s�o constitu�dos por antigenos de grupos sangu�neos definidos por aloanticorpos. Apresentam ampla diversidade incluindo atualmente 29 sistemas, 34 locus, 239 ant�genos e > 620 alelos. O maior sistema eritrocit�rio � o sistema Rh, seguido pelo MNS, Kell e Diego.Os sistemas eritrocit�rios s�o constitu�dos por antigenos de grupos sangu�neos definidos por aloanticorpos. Apresentam ampla diversidade incluindo atualmente 29 sistemas, 34 locus, 239 ant�genos e > 620 alelos. O maior sistema eritrocit�rio � o sistema Rh, seguido pelo MNS, Kell e Diego.

3. Modelo de membrana: inser��o dos ant�genos de grupos sangu�neos Os ant�genos eritrocit�rios s�o carbohidratos ou prote�nas localizados em glicol�pides ou prote�nas da superf�cie da membrana eritrocit�ria ou prote�nas ligadas a glicosilfosfatidilinositol. Atravessam uma �nica vez (tipos 1 e 2) a membrana ou apresentam m�ltiplas passagens. Os ant�genos eritrocit�rios s�o carbohidratos ou prote�nas localizados em glicol�pides ou prote�nas da superf�cie da membrana eritrocit�ria ou prote�nas ligadas a glicosilfosfatidilinositol. Atravessam uma �nica vez (tipos 1 e 2) a membrana ou apresentam m�ltiplas passagens.

4. Os genes de 28 dos 29 sistemas j� foram clonados e sequenciados, apenas o gene que codifica os ant�genos dos sistema P n�o foi ainda sequenciado. Assim, os polimorfismos de GS podem ser definidos ao n�vel gen�tico e an�lise molecular destes genes pode ser �til na cl�nica. Al�m disto, o entendimento das bases moleculares de GS permitem explorar as fun��es das prote�nas que os carreiam.Os genes de 28 dos 29 sistemas j� foram clonados e sequenciados, apenas o gene que codifica os ant�genos dos sistema P n�o foi ainda sequenciado. Assim, os polimorfismos de GS podem ser definidos ao n�vel gen�tico e an�lise molecular destes genes pode ser �til na cl�nica. Al�m disto, o entendimento das bases moleculares de GS permitem explorar as fun��es das prote�nas que os carreiam.

5. Ant�genos de grupos sanguineos est�o localizados em mol�culas funcionais Este conhecimento permitiu demonstrar que os ant�genos de GS est�o localizados em mol�culas funcionais na membrana eritrocit�ria e assim foram classificados em 6 grupos de acordo com as fun��es de cada mol�cula. Este conhecimento permitiu demonstrar que os ant�genos de GS est�o localizados em mol�culas funcionais na membrana eritrocit�ria e assim foram classificados em 6 grupos de acordo com as fun��es de cada mol�cula.

6. Mecanismos moleculares que levam � diversidade dos ant�genos de grupos sangu�neos Os mecanismos moleculares que levam a diversidade dos antigenos de GS incluem: SNPs, inser��es, dele�oes, rearranjos g�nicos. Sem d�vida o SNP( troca de 1 nucleot�deo com substitui��o de 1 amino�cido) � o mais comum. A partir do momento que se conhece as bases moleculares � poss�vel identificar o polimorfismo de GS atrav�s da an�lise de DNA.Os mecanismos moleculares que levam a diversidade dos antigenos de GS incluem: SNPs, inser��es, dele�oes, rearranjos g�nicos. Sem d�vida o SNP( troca de 1 nucleot�deo com substitui��o de 1 amino�cido) � o mais comum. A partir do momento que se conhece as bases moleculares � poss�vel identificar o polimorfismo de GS atrav�s da an�lise de DNA.

7. SNPs (muta��es de ponto missenses) Os mecanismos moleculares que levam a diversidade dos antigenos de GS incluem: SNPs, inser��es, dele�oes, rearranjos g�nicos. Sem d�vida o SNP( troca de 1 nucleot�deo com substitui��o de 1 amino�cido) � o mais comum. A partir do momento que se conhece as bases moleculares � poss�vel identificar o polimorfismo de GS atrav�s da an�lise de DNA.Os mecanismos moleculares que levam a diversidade dos antigenos de GS incluem: SNPs, inser��es, dele�oes, rearranjos g�nicos. Sem d�vida o SNP( troca de 1 nucleot�deo com substitui��o de 1 amino�cido) � o mais comum. A partir do momento que se conhece as bases moleculares � poss�vel identificar o polimorfismo de GS atrav�s da an�lise de DNA.

8. Transcri��o

9. Rearranjos g�nicos

10. M�todos de an�lise de DNA Amplifica��o do DNA por PCR PCR-RFLP PCR-alelo-especifico PCR-multiplex Amplifica��o (PCR) + sonda-especifica (probe)-Real time PCR TaqMan Molecular beacons Microarray � chips Os m�todos de an�lise de DNA incluem> PCR-RFLP (PCR + enzima de digest�o), AS-PCR, PCR multiplex. Estes m�todos tem sido os mais frequentemente utilizados e necessitam de an�lise por eletroforese em gel de agarose ou poliacrilamida Real time PCR (amplifica��o + sonda espec�fica marcada com fluoresce�na (taqman) ou sinais moleculares s�o utilizados para realiza��o de PCR quantitativos ou detec��o de baixas concentra��es de DNA. N�o utiliza eletroforese em gel. Microarrays tecnologia chip: m�todo que est� ganhando um grande espa�o para genotipagem de GS em larga escala (screening de doadores) pois permite automa��o e identifica��o de v�rios alelos de uma �nica vez. Os m�todos de an�lise de DNA incluem> PCR-RFLP (PCR + enzima de digest�o), AS-PCR, PCR multiplex. Estes m�todos tem sido os mais frequentemente utilizados e necessitam de an�lise por eletroforese em gel de agarose ou poliacrilamida Real time PCR (amplifica��o + sonda espec�fica marcada com fluoresce�na (taqman) ou sinais moleculares s�o utilizados para realiza��o de PCR quantitativos ou detec��o de baixas concentra��es de DNA. N�o utiliza eletroforese em gel. Microarrays tecnologia chip: m�todo que est� ganhando um grande espa�o para genotipagem de GS em larga escala (screening de doadores) pois permite automa��o e identifica��o de v�rios alelos de uma �nica vez.

11. PCR-RFLP (Polimorfismo Duffy) Ex PCR-RFLPEx PCR-RFLP

12. RFLP para genotipagem Duffy  RFLP para genotipagem FY. Aqui temos um fragmento de 392 pb que � o produto de PCR amplificado, onde se observa um s�tio de restri��o comum para Ban I que o corta em 2 fragmentos. No entanto, a muta��o FYA gera um s�tio adicional cortando o fragmento maior de 306 pb em 2. Assim nesta figura podemos ver um RFLP para FY ap�s eletroforese em gel de poliacrilamida RFLP para genotipagem FY. Aqui temos um fragmento de 392 pb que � o produto de PCR amplificado, onde se observa um s�tio de restri��o comum para Ban I que o corta em 2 fragmentos. No entanto, a muta��o FYA gera um s�tio adicional cortando o fragmento maior de 306 pb em 2. Assim nesta figura podemos ver um RFLP para FY ap�s eletroforese em gel de poliacrilamida

13. PCR Alelo-Especifico (AS-PCR): Ss AS-PCR paa genotipagem Ss. Amplifica��o de cada alelo � separada utilzando-se primers espec�ficos para a muta��o polim�rfica. Utiliza-se sempre um controle interno da rea��o.AS-PCR paa genotipagem Ss. Amplifica��o de cada alelo � separada utilzando-se primers espec�ficos para a muta��o polim�rfica. Utiliza-se sempre um controle interno da rea��o.

14. PCR Multiplex: RHCE Cc e RHDy PCR multiplex. Ex: genotipagem RHD. Cc utilzando em uma mesma rea��o v�rios pares de primers que reconhecem as diferentes muta��es polim�rficas. PCR multiplex. Ex: genotipagem RHD. Cc utilzando em uma mesma rea��o v�rios pares de primers que reconhecem as diferentes muta��es polim�rficas.

15. Real Time PCR Real time PCR. N�o utiliza gel e possibilita quantifica��o do DNA presente. M�todo mais sens�vel e tem sido utilizado na genotipagem fetal em plasma materno.Real time PCR. N�o utiliza gel e possibilita quantifica��o do DNA presente. M�todo mais sens�vel e tem sido utilizado na genotipagem fetal em plasma materno.

16. Microarray. T�cnica que est� sendo padronizada para determina�a� de v�rios polimorfismos. At� 100 alelos em uma �nica rea��o. Alternativa para genotipagem em larga escala. Em uma l�mina � colocado um chip contendo micropart�culas coloridas que se tornam funcionais com a liga��o de uma sonda de oligonucleot�deos marcada com flouresce�na contendo uma sequencia complementar espec�fica para um determinado alelo. Assim para cada alelo existe uma cor espec�fica. Quando esta sonda se hibridiza com o alelo presente na amostra de DNA h� emiss�o de fluoresc�nciaMicroarray. T�cnica que est� sendo padronizada para determina�a� de v�rios polimorfismos. At� 100 alelos em uma �nica rea��o. Alternativa para genotipagem em larga escala. Em uma l�mina � colocado um chip contendo micropart�culas coloridas que se tornam funcionais com a liga��o de uma sonda de oligonucleot�deos marcada com flouresce�na contendo uma sequencia complementar espec�fica para um determinado alelo. Assim para cada alelo existe uma cor espec�fica. Quando esta sonda se hibridiza com o alelo presente na amostra de DNA h� emiss�o de fluoresc�ncia

17. Microarray � Tecnologia Chip Esta t�cnica n�o elimina a realiza��o do PCR. Assim, um PCR multiplex � realziado com um conjunto de primers espec�ficos para v�rios polimorfismos. Estes primers s�o fosforilados. Ap�s limpeza do PCR para retirada de primers e dntp e separa��o das fitas, � realizada uma rea��o enzim�tica para hibridiza��o das fitas com as sequencias complementares presentes nas sondas de cada micropar�cula do chip. Assim quando ocorre a hibridiza��o h� emiss�o de luoresc�ncia que � capturada por um sistema de imagem a autom�tico. Esta t�cnica n�o elimina a realiza��o do PCR. Assim, um PCR multiplex � realziado com um conjunto de primers espec�ficos para v�rios polimorfismos. Estes primers s�o fosforilados. Ap�s limpeza do PCR para retirada de primers e dntp e separa��o das fitas, � realizada uma rea��o enzim�tica para hibridiza��o das fitas com as sequencias complementares presentes nas sondas de cada micropar�cula do chip. Assim quando ocorre a hibridiza��o h� emiss�o de luoresc�ncia que � capturada por um sistema de imagem a autom�tico.

20. Fontes de DNA que podem ser utilizadas para genotipagem Sangue (Leuc�citos) C�lulas do epit�lio bucal Urina (c�lulas no sedimento urin�rio) L�quido amni�tico (amni�citos) DNA fetal em plasma materno

21. Genotipagem em larga escala para identifica��o de ant�genos comuns e raros (Programa de hem�cias fenotipadas) Produ��o de pain�is complementares Zigozidade D, Fya, Fyb : controle de qualidade de reagentes Determina��o dos tipos de D fraco e D parcial Identifica��o de novos alelos Gen�tica molecular dos sistemas eritrocit�rios: aplica��es

22. Gen�tica molecular dos sistemas eritrocit�rios: aplica��es Resolu��o de casos cl�nicos em situa��es que os testes de hemaglutina��o n�o fornecem resultados seguros (pacientes rec�m-transfundidos, pacientes portadores de AHAI aloimunizados) Resolu��o de discrep�ncias ABO e Rh Determina��o de microquimerismo ap�s transplante de stem cell alog�nico Identifica��o de fen�tipos fracos e deprimidos (D fraco, e fraco) Investiga��o e confirma��o de fen�tipos raros (DI, DO, SC, CO) Identifica��o de variantes raras (D parcial + e parcial) Identifica��o de novos alelos Outras importantes aplica��es da genotipagem de grupos sangu�neos incluem: a confirma��o de discrepancias ABO/Rh, a determina��o da zigosidade do ant�geno RhD, principalmente em pais de fetos de m�es RhD negativo sensibilizadas, na determina��o de ant�genos fracos ou deprimidos muitas vezes dif�ceis de serem detectados por hemaglutina��o; na caracteriza��o de ant�genos RhD parciais, especialmente a categoria DIIIa; na identifica��o de pacientes Fy(b-) que podem ser seguramente transfundidos com hem�cias Fy(b+) ou seja, aqueles pacientes que possuem o gen FYB silencioso nas hem�cias devido a uma muta��o no gen promotor. Outras importantes aplica��es da genotipagem de grupos sangu�neos incluem: a confirma��o de discrepancias ABO/Rh, a determina��o da zigosidade do ant�geno RhD, principalmente em pais de fetos de m�es RhD negativo sensibilizadas, na determina��o de ant�genos fracos ou deprimidos muitas vezes dif�ceis de serem detectados por hemaglutina��o; na caracteriza��o de ant�genos RhD parciais, especialmente a categoria DIIIa; na identifica��o de pacientes Fy(b-) que podem ser seguramente transfundidos com hem�cias Fy(b+) ou seja, aqueles pacientes que possuem o gen FYB silencioso nas hem�cias devido a uma muta��o no gen promotor.

23. Zigozidade do gene RHD paterno Genotipagem RHD fetal DNA de amni�citos DNA de origem fetal na circula��o materna (usar DNA de plasma materno) Gen�tica molecular dos sistemas eritrocit�rios: aplica��es Algumas das aplica��es da biologia molecular no sistema Rh e que vem complementar a sorologia s�o:Algumas das aplica��es da biologia molecular no sistema Rh e que vem complementar a sorologia s�o:

24. Genotipagem eritrocit�ria na pr�tica cl�nica Caso cl�nico 1: Paciente politransfundido aloimunizado com anti-E e prov�vel anti-Jkb e hist�ria de transfus�o recente Fenotipagem: R2r, K-k+, Fy(a+b-), Jk(a-b+)

25. Caso cl�nico 1: Genotipagem:RHD+ RHCE cc ee, K2K2, FY A/FY A, JK A/JK A Genotipagem eritrocit�ria na pr�tica cl�nica

26. Caso cl�nico 2: Paciente politransfundido com TDA positivo (4+) eluato e soro positivos 4+ com todas as c�lulas, hist�ria de transfus�o recente e evid�ncia cl�nica de diminui��o da sobrevida de hem�cias transfundidas Fenotipagem do paciente: ? Genotipagem do paciente: RHD-, RHCE cc ee, K2K2, FY A/FY B, JK A/JK B, Ms/Ns An�lise sorol�gica complementar adsor��es alog�nicas com hem�cias rr, K-, S- para retirada do autoac Conclus�o: Aloanticorpos detectados:anti-E, -K Genotipagem eritrocit�ria na pr�tica cl�nica

27. Caso cl�nico 3: Paciente falciforme aloimunizado com anti-E, anti-K e anti-Jka recebendo sangue fen�tipo compat�vel Fenotipagem do paciente: R0r, K-k+, Fy(a-b-), Jk(a-b+) Genotipagem do paciente: RHD+, RHCE cc ee , K2K2, FY B/FY B (Gata mutado), JK B/JK B Conclus�o: Paciente pode receber sangue Fy(b+) Genotipagem eritrocit�ria na pr�tica cl�nica

28. Caso cl�nico 4: Paciente sexo feminino, 27 anos, hist�ria de 1 transfus�o anterior, nenhuma gesta��o ou aborto Aloimunizada com anti-D Fenotipagem da paciente: D- Fenotipagem do doador da hem�cia transfundida: D-

30. Caso cl�nico 5: Paciente falciforme aloimunizado com anti-D e anti-K Fenotipagem do paciente: R0r (D fraco), K-k+ Genotipagem do paciente: RHD+, RHCE cc ee , K2K2

31. Genotipagem complementar: D parcial DAR

32. D fracos tipos 1> 4> 3> 2 mais frequentes Anti-D IgM: pacientes; anti-D IgG:doadores Reatividades < 1+ com anti-D IgG na AGH podem indicar a presen�a de DAR, DVI, DHMi

33. Caso cl�nico 6: Paciente falciforme aloimunizado com anti-e like, anti-E e prov�vel anti-D Fenotipagem do paciente: B, D+C+E-c+e+ Sangue selecionado para a transfus�o: R2R2 e rr (incompat�vel) Genotipagem do paciente: RHD+, RHCE cc ee , Genotipagem complementar (e-parcial): ces (hrB-) Genotipagem complementar (D-parcial): DIIIa

35. Quando o paciente fenotipado como RhD-negativo apresentar o pseudogene RHD, deve-se considerar o resultado do fen�tipo uma vez que o gene RHD? n�o � expresso. Estes indiv�duos podem desenvolver aloanticorpo anti-D se vierem a ser transfundidos com hem�cias RhD-positivo. Em nosso estudo, 2 (18%) dos 11 pacientes RhD-negativo estudados, fenotipados como D-C(+)c+E-e+VS+, apresentaram o gene h�brido. Estas amostras foram RhD-positivas pela an�lise do exon 10 mas, D-negativas pela an�lise do intron 4 e exon 7. Recomenda-se nestes pacientes, a amplifica��o do gene RHD em diferentes regi�es (intron 4, exon 7 e exon 10 onde RHD e RHCE diferem) e a utiliza��o de uma t�cnica de PCR multiplex que detecta a presen�a de RHD-CE-Ds (MAASKANT van WIJK et al, 1998) . Pacientes que apresentam o gene h�brido devem ser considerados RhD-negativo. Quando o paciente fenotipado como RhD-negativo apresentar o pseudogene RHD, deve-se considerar o resultado do fen�tipo uma vez que o gene RHD? n�o � expresso. Estes indiv�duos podem desenvolver aloanticorpo anti-D se vierem a ser transfundidos com hem�cias RhD-positivo. Em nosso estudo, 2 (18%) dos 11 pacientes RhD-negativo estudados, fenotipados como D-C(+)c+E-e+VS+, apresentaram o gene h�brido. Estas amostras foram RhD-positivas pela an�lise do exon 10 mas, D-negativas pela an�lise do intron 4 e exon 7. Recomenda-se nestes pacientes, a amplifica��o do gene RHD em diferentes regi�es (intron 4, exon 7 e exon 10 onde RHD e RHCE diferem) e a utiliza��o de uma t�cnica de PCR multiplex que detecta a presen�a de RHD-CE-Ds (MAASKANT van WIJK et al, 1998) . Pacientes que apresentam o gene h�brido devem ser considerados RhD-negativo.

36. Caso cl�nico 7: Paciente falciforme aloimunizado com anti-C e anti-K Fenotipagem do paciente: R2R2, K-k+ Genotipagem do paciente: RHD+, RHCE cc Ee , K2K2 Genotipagem complementar: VS+, Cys16 Conclus�o: e+f (variante): paciente R2r

37. Considerando a import�ncia do ant�geno Rhe na medicina transfusional e a associa��o destas duas variantes com o alelo RH ce em africanos, estudamos a sua ocorr�ncia em 58 pacientes falciformes que apresentavam o alelo RH ce. A ocorr�ncia simult�nea das muta��es 48C (Cys16) e 733G (VS) foi observada em 50 pacientes demonstrando que ambas muta��es s�o freq�entes em descendentes de africanos com o alelo RH ce. Estas muta��es foram encontradas em heterozigoze sugerindo que estes pacientes apresentavam a muta��o 48C em um alelo e a muta��o 733G em outro, o que teoricamente levaria a uma fraca express�o do ant�geno Rhe nas hem�cias. De fato, quando foi realizada a fenotipagem do ant�geno Rhe nas hem�cias de 10 destes pacientes, empregando cinco anti-soros monoclonais de proced�ncias diferentes, verificou-se que tr�s dos anti-soros utilizados n�o as aglutinaram, o que demonstra que a express�o do ant�geno Rhe encontrava-se enfraquecida. Se considerarmos que qualquer um dos 3 anti-soros monoclonais por n�s utilizados, n�o detectaram o ant�geno Rhe, podem ser empregados na rotina de fenotipagem, estes pacientes poderiam ter sido classificados erroneamente como Rhe-negativo. Este resultado levaria a uma diminui��o consider�vel na disponibilidade de sangue para estes indiv�duos, uma vez que o fen�tipo Rhe-negativo ocorre na frequ�ncia de 1/50 em nossa popula��o. At� o momento, n�o foi detectado anticorpo anti-e em pacientes que apresentam estas variantes. Considerando a import�ncia do ant�geno Rhe na medicina transfusional e a associa��o destas duas variantes com o alelo RH ce em africanos, estudamos a sua ocorr�ncia em 58 pacientes falciformes que apresentavam o alelo RH ce. A ocorr�ncia simult�nea das muta��es 48C (Cys16) e 733G (VS) foi observada em 50 pacientes demonstrando que ambas muta��es s�o freq�entes em descendentes de africanos com o alelo RH ce. Estas muta��es foram encontradas em heterozigoze sugerindo que estes pacientes apresentavam a muta��o 48C em um alelo e a muta��o 733G em outro, o que teoricamente levaria a uma fraca express�o do ant�geno Rhe nas hem�cias. De fato, quando foi realizada a fenotipagem do ant�geno Rhe nas hem�cias de 10 destes pacientes, empregando cinco anti-soros monoclonais de proced�ncias diferentes, verificou-se que tr�s dos anti-soros utilizados n�o as aglutinaram, o que demonstra que a express�o do ant�geno Rhe encontrava-se enfraquecida. Se considerarmos que qualquer um dos 3 anti-soros monoclonais por n�s utilizados, n�o detectaram o ant�geno Rhe, podem ser empregados na rotina de fenotipagem, estes pacientes poderiam ter sido classificados erroneamente como Rhe-negativo. Este resultado levaria a uma diminui��o consider�vel na disponibilidade de sangue para estes indiv�duos, uma vez que o fen�tipo Rhe-negativo ocorre na frequ�ncia de 1/50 em nossa popula��o. At� o momento, n�o foi detectado anticorpo anti-e em pacientes que apresentam estas variantes.

38. Caso cl�nico 8: Paciente talass�mico aloimunizado com anti-c, anti-K, anti-Jka e outro aloac? Recebendo sangue fen�tipo compat�vel Fenotipagem do paciente: R0r, K-k+, Fy(a+b-), Jk(a-b+), M+N+S+s+ Genotipagem do paciente: RHD+ RHCE cc ee, K2K2, FY A/FY A, JK B/JK B, MS/Ns

39. Caso cl�nico 8: An�lise molecular complementar: DO A/DO A An�lise sorol�gica complementar adsor��o com hem�cias R0r, K-, Fy(b-), Jk(a-), Do(b+) /elui��o): anti-Dob Conclus�o: Paciente portador de anti-c, -K, -Jka, Dob

40. Identifica��o de anticorpos anti-Do Possibilidade de genotipar os doadores e selecionar hem�cias ant�geno-negativas Maior aproveitamento transfusional

41. Caso cl�nico 9: Gestante aloimunizada (200 semana) Anticorpo identificado: Anti-D (t�tulo: 512) Fen�tipo da paciente: rr

42. Zigozidade paterna Genotipagem RHD fetal

43. Caso cl�nico 10: Gestante aloimunizada (120 semana) Anticorpo identificado: Anti-D (t�tulo: 512) Fen�tipo da paciente: rr

44. Zigozidade paterna Genotipagem RHD fetal

45. Situa��es em que gen�tipo e fen�tipo podem n�o corresponder Transfus�es cr�nicas/maci�as Altera��o no gene afetando: transcri��o (Fyb-); splicing (S-s-); introdu��o de stop codon (Fy(a-b-), Rhnull), ou muta��o que afeta a estabilidade da proteina na membrana da c�lula (Fyx) Crossing overs e outros rearranjos g�nicos (RHD/RHCE) Altera��o em outro gene que est� associado com a express�o do gene : RHAG ?Rhnull

46. Implementa��o da genotipagem para uso cl�nico Amostras de sangue fenotipadas devem ser analisadas por PCR em estudo cego para avalia��o do m�todo O n�mero de amostras usadas na valida��o de um teste deve incluir o m�ximo de variantes gen�ticas presentes na popula��o para a qual o teste vai ser utilizado Popula��o Europeia Vs Popula��o Brasileira Revalida��o do teste com novas variantes Participa��o em testes de profici�ncia

47. Gen�tica molecular dos sistemas eritrocit�rios na popula��o brasileira Melhoria da qualidade e exatid�o dos resultados imunohematol�gicos Determina��o de novas variantes al�licas n�o descritas em outras popula��es (DIA/166A, FY145, Rhnull) Identifica��o de variantes al�licas de origem Africana (GATA, RHD?, RHD-CE-Ds, VS, DIIIa, DAR) Elabora��o de protocolos de genotipagem eficientes One particular area where molecular genotyping can have value in the clinical setting is to identify a fetus at risk from alloantibodies to blood groups and platelet antigens. A second area of focus in the clinical laboratory is in the resolution of clinical cases where hemagglutination assays can not provide conclusisve results, for example in multi-transfused patients as an aid in the antibody identification process. A third area of clinical utility is in typing blood donors with unclear phenotype.One particular area where molecular genotyping can have value in the clinical setting is to identify a fetus at risk from alloantibodies to blood groups and platelet antigens. A second area of focus in the clinical laboratory is in the resolution of clinical cases where hemagglutination assays can not provide conclusisve results, for example in multi-transfused patients as an aid in the antibody identification process. A third area of clinical utility is in typing blood donors with unclear phenotype.

48. Genotipagem de grupos sangu�neos na cl�nica requer: Conhecimento em grupos sangu�neos Experi�ncia na interpreta��o das rea��es de PCR utilizadas Obten��o dos achados sorol�gicos e da hist�ria cl�nica do paciente antes de interpretar os resultados da genotipagem Conhecimento dos genes que codificam os ant�genos de GS e suas formas variantes (fen�tipos e gen�tipos podem n�o correlacionar) na popula��o estudada

49. A genotipagem de grupos sangu�neos � uma ferramenta �til na medicina transfusional e apresenta gradualmente um n�mero crescente de aplica��es. Torna-se poderosa quando associada a hemalutina��o Os m�todos moleculares permitem obter um melhor conhecimento da distribui��o dos grupos sangu�neos e suas bases moleculares na popula��o brasileira Achados moleculares na popula��o brasileira ajudam a desenvolver protocolos mais seguros para genotipagem de grupos sangu�neos em nossos laborat�rios