Exon 5

1. Rivera B1, González S2, Sánchez-Tomé E1, Blanco I2,Mercadillo F1, Capellá G2, Robledo M3,4, Benítez J1,3, Urioste M1,3 1Grupo de Genética humana, Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), Madrid. 2 InstitutCatalàd'Oncologia, L'Hospitalet de Llobregat, Barcelona. 3Centro de Investigaciones en Red en Enfermedades Raras (CIBERER), Instituto de Salud Carlos III, Madrid;; y 4HGrupo de Cáncer Endocrino, Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO), Madrid; España. Poliposis Adenomatosa Familiar clásica no asociada a mutaciones en los genes APC y MUTYH: ¿Es unaentidad con una base genéticadiferente? Pacientes En un trabajoprevio en el que se estudiaron 136 familias con PAF clásica, el 21% resultaronnegativasparamutaciones en APCy MUTYH 1. Introducción y objetivos: La Poliposis Adenomatosa Familiar (PAF) se caracterizapor la presencia de más de 100 adenomas en colon, y porunaherenciaautosómicadominanteasociada a mutaciones en APC. Existencasos de PAF con patrones de herenciarecesivosque se deben a mutaciones bialélicas en el gen MUTYH. La tasa de detección de mutacionesgerminalesdepende de lascaracterísticasclínicas del paciente y de la técnicautilizada. En un 80% de las PAF clásicas se detectanmutaciones en APC, mientrasque solo en un 20-30% de los fenotiposatenuados. Las mutaciones en el gen MUTYH, son máscomunes en lasformasatenuadasperoexplicantambién un 4-5% de lasclásicas. Hemoscomparadolascaracterísticasclínica entre los pacientes con mutación en APC y aquellos sin mutaciónni en APCni en MUTYH. Box 3: ESTUDIOS DE DESBALANCE ALÉLICO * El grupoAPC-positivoincluyemutaciones y grandesreordenamientos.** Los casos se consideranseveroscuando se desarrollanmás de 1.000 pólipos; NS: No significativo; ME: Manifestations Extracolónicas. • Objetivos: • Nuestroobjetivo actual se basa en determinarlas bases moleculares de 28 familiasAPC/MUTYH-negativas. • Primerodescartando la implicación de los genes APCy MUTYH. • Posteriormenteestudiandootros genes implicados en la vía Wnt y tratando de identificarperfiles de expresióndiferencialesmedianteunamatriz de tejido. Puntos de corte : <0.67 />1.5 Box 1: CASO FAMILIAR En un caso familiar pudimosestudiarvariosmiembros en la familia y se realizó un estudio de segregación con microsatélites queflanquean el locus del gen APC. • Uno de los probandiquepresentabaantecedentes de la enfermedad y un fenotiposevero, resultóportador de la mutaciónc.5790delA;pGln1930HisfsX40, en el extremo 3’ del gen APC (áreaasociada a fenotiposatenuados). • Otropaciente con fenotiposevero y antecedentesfamiliares de poliposis presentaunamutación en el área de procesamientoalternativo en el intrón 5 imperceptible mediantesecuenciación de DNA quefueencontradatras el estudio en cDNA . La enfermedadsegrega con el locus del gen y , posteriormenteencontramosunaexpresiónalélicadiferencial. Porúltimo en esta y en otrafamilia se encontróunamutación en el principio del exón 5 de APCmediante el estudio de cDNA. Exon 5 Exon 6 Box 2: ESTUDIO DE OTRAS REGIONES DEL GEN. Hemosevaluado un posibledesbalancealélicomediante la técnica del SNaPshot. Previamente se determinaron los niveles de expresión en controlessanosjunto con líneascelularesparaestablecer los niveles de expresión normal del gen APC. Dos casosAPC+ y otrocasoAPC/MUTYH- (ver Box 1) mostraron un evidentedesbalancealélico. ASE positivo ASE borderline CONCLUSIONES: Las familiasAPC/MUTYH-negativasconstituyen un grupo de graninterés. Hemosampliado el estudioconvencional de los genes APC y MUTYHencontrando 4/28 ( 14.2%) de casospositivos. Estasfamiliasnegativasprobablementeconforman un grupogenéticamenteheterogéno lo quepodríaexplicarlasdiferenciasclínicas. En el momento actual continuamos el estudio de otros genes implicados en la vía Wnt y lo completaremos con unamtriz de tejidoparaanalizar la expresión de proteínasimplicadas en rutas de carcinogénesis colorrectal. • Hemosestudiadoporsecuenciacióndirecta los promotores 1A y 1B del gen APCencontrandounavariante de significadodesconocido en la quetenemosquerealizarnuevosestudiosparadiscernirsupatogenicidad. • Ademáshemosestudiado los patrones de metilación germinal de ambos promotores en 3 casosAPC/MUTYH– quemostrarondesbalance alélico o valorescercanos a los límitesconsideradospositivos. Evaluamos 10 clones de cadamuestra y no encontramosningúnpatrón de metilaciónsignificativo. Concluimosaísque los cambiosepigenéticos no son responsables de los desbalancesalélicos en estasfamilias. Referencias: 1 B. Rivera et al. Clinical and genetic characterization of classical forms of familial adenomatous polyposis: a Spanish population study. Ann of Oncol (2010).