1 / 78

Analytické metody

Analytické metody. Vladimíra Kvasnicová. SPEKTROFOTOMETRIE CHROMATOGRAFIE POTENCIOMETRIE VOLUMETRIE. Spektrofotometrie. spektrofotometr. Materiál používaný pro analýzu: ROZTOK. PRINCIP interakce mezi stanovovaným analytem a monochromatickým zářením

wesley-pittman
Télécharger la présentation

Analytické metody

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Analytické metody Vladimíra Kvasnicová

  2. SPEKTROFOTOMETRIE • CHROMATOGRAFIE • POTENCIOMETRIE • VOLUMETRIE

  3. Spektrofotometrie spektrofotometr

  4. Materiál používaný pro analýzu: ROZTOK

  5. PRINCIP • interakce mezi stanovovaným analytem a monochromatickým zářením • část záření je absorbovánastanovovanou látkou, zbývajícízáření je detekováno detektorem • množství absorbovaného záření je přímoúměrné množství analyzované látky

  6. Spektrofotometrie je kvantitativní metoda:stanovujemeKONCENTRACI  koncentrace  tmavší roztok  absorpce

  7. Důležité termíny vzorek = analyzovaný roztok neznámý vzorek = vzorek o neznámé koncentraci standard = vzorek o známé koncentraci blank = roztok neobsahující analyzovanou látku chromofor = část struktury chemické látky, která je schopna absorbovat záření určité vlnové délky

  8. fialová 380 – 450 nm modrá 450 – 495 nm zelená 495 – 570 nm žlutá 570 – 590 nm oranžová 590 – 620 nm červená 620 – 750 nm viz. http://en.wikipedia.org/wiki/Electromagnetic_spectrum

  9. Obrázek převzat z http://en.wikipedia.org/wiki/Electromagnetic_spectrum (2006)

  10. Používané elektromagnetické záření • barevné vzorky: viditelné (VIS) • bezbarvé vzorky: UV záření

  11. A /  „absorpční spektrum“

  12. Komplementární barvy

  13. SCHÉMA spektrofotometru

  14. Které veličiny jsou měřeny? TRANSMITANCE = poměr intenzity záření vystupujícího z kyvety (I) k intenzitě záření do kyvety vstupující (Io) (tj. záření dopadající na detektor / původní záření) T = I / Io T = 0 – 1 nebo v procentech % (0 – 100 %)

  15. Jak se vyjadřuje množství pohlceného záření? veličina odvozená od transmitance: ABSORBANCE A = - log10 T = - log10 (I/I0) = log10 (I0/I) = log10 (1/T) A = 0 – 1.0 (1.5 nebo více) horní limit závisí na citlivosti detektoru

  16.  citlivosti detektoru

  17. Zjištění koncentrace: • Lambert-Beerův zákon • Kalibrační křivka • Výpočet pomocí hodnot (A, c) standardních vzorků

  18. Zjištění koncentrace: Lambert-Beerův zákon A =  x l x c nebo T = 10- ( x l x c) A = absorbance (A = -log T) T = transmitance (T = 10-A)  = molární absorpční („extinkční“) koeficient l = tloušťka kyvety (v cm), c = molární koncentrace

  19. Kalibrační křivka 3 a více standardů zpracovaných stejnou metodou lineární kalibrační křivka A =  x lxc y = kx + q

  20. Výpočet pomocí standardů Ast = cstx l xAvz = cvzx l x  Ast / cst = l xAvz / cvz =l x  l x = l x Ast / cst = Avz / cvz cvz= Avz x(cst /Ast) cvz = Avz x f f = průměr všech (cst /Ast) použitých při experimentu

  21. Cvičení 1) Avz = 0,25 Cvz = ? Ast = 0,40 Cst = 4mg / L 2) standard glukózy: Cs = 1000mg/L, T = 0,49. neznámý vzorek: T = 0,55, Cvz = ? (v mg/L i mmol/L) MW = 180g 3) standard proteinů: T = 0,33;vzorek pacienta: T =0,44 Porovnejte koncentraci proteinů ve vzorku pacienta se standardem.

  22. Přesnost stanovení absorpce ostatními látkami přítomnýmive vzorku musí být eliminována: BLANK (slepý pokus) → jeho absorbance se odečte od absorbance vzorku  výsledná absorbance odpovídá pouze koncentraci analyzované látky

  23. Spektrofotometrie vpraktickém cvičení „Stanovení koncentrace kreatininu v moči“ analyzovaný vzorek: vlastní moč • bezbarvý kreatinin je převeden na barevný produkt chemickou reakcí • koncentrace kreatininu ve vzorku se zjišťuje z naměřené absorbance pomocí kalibrační křivky

  24. Chromatografie chromatograf

  25. Všechny chromatografické techniky nejsou instrumentální... TLC chromatografie = úkol v praktiku

  26. PRINCIP Separace směsi různých látek je založena na rozdílné distribuci látek mezi dvěnemísitelné fáze: • stacionární fáze (pevná nebo kapalná) • mobilní fáze (kapalná nebo plynná) Mobilní fáze unáší jednotlivé vzorky skrz stacionární fázirozdílnou rychlostí v závislosti na jejich afinitě k fázím.

  27. pokud je „afinita“ látky k mobilní fázi vysoká, látka putuje systémem rychleji než látka s nižší afinitou • pokud je „afinita“ látky ke stacionární fázi vysoká, látka je ve stacionární fázi déle zadržována a pohybuje se sytémem pomaleji než látka mající nižší afinitu

  28. Obrázek převzat z http://www.chemistry.vt.edu/chem-ed/sep/lc/lc.html (listopad 2006)

  29. Co je cílem analýzy? • rozdělit (separovat) od sebe jednotlivé látky • identifikovat látky (= kvalitativní analýza) • stanovit koncentraci přítomných látek (= kvantitativní analýza)

  30. Klasifikace chromatografických technik • podle mobilní fáze • kapalinová chromatografie (LC) • plynová chromatografie (GC) • podle uspořádání • planární (rovinná) chromatografie • chromatografie v koloně

  31. kapalinová v koloně „manuální“ chromatografie

  32. kapalinová v koloně „instrumentální“ chromatografie

  33. příklad: kapalinová planární chromatografie

  34. Plynová chromatografie (GC) Obrázek převzat z http://www.cofc.edu/~kinard/221LCHEM/ (listopad 2006)

  35. podle fyzikálně-chemických interakcí • adsorpční chromatografie • rozdělovací chromatografie • gelová permeační chromatografie (GPC) • chromatografie na iontoměničních(IONEX) • afinitní chromatografie

  36. Fyzikálně-chemické mechanismy separace sítový efekt – gelová chromatografie adsorpce rozpouštění iontová výměna specifická interakce- afinitní chromatografie Snímek převzat z prezentace analyticke_metody / Petr Tůma

  37. Obrázek převzat z http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/255/255tech/255techniques.htm (listopad 2006)

  38. Obrázek převzat z http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/255/255tech/255techniques.htm (listopad 2006)

  39. Obrázek převzat z http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/255/255tech/255techniques.htm (listopad 2006)

  40. Vyhodnocení chromatogramu 1) planární chromatografie (př. TLC) Porovnání skvrn se standardy: Rf = a /b Rf = retardační faktor („rate of flow“) a = vzdálenost start-střed skvrny b = vzdálenost start-čelo mobilní f. „b“ „a“ Obrázek převzat zhttp://sms.kaist.ac.kr/~jhkwak/gc/catofp/chromato/tlc/tlc.htm (listopad 2006)

  41. 2) chromatografie v koloně (HPLC, GC) • Porovnání „píků“ se standardy: • tR = retenční čas • identifikace látek h = výška píku  koncentrace látek „píky“

  42. Chromatografie v praktickém cvičení „ TLC lipofilních barviv“ = adsorpční planární kapalinová chromatografie • mobilní fáze: toluen (nepolární) • stacionární fáze: destička se silikagelem (polární) • stadardy barviv → porovnání Rf • neznámý vzorek: obsahuje 2 různá barviva

  43. „Demonstrace HPLC a GC“ HPLC = High Performance Liquid Chromatography (vysokoúčinná kapalinová chromatografie) • normální nebo reverzní fáze • princip (vysokoúčinná, vysokotlaká chromatogr.) GC = Gas Chromatography(plynová chromatografie)

  44. Potenciometrie potenciometr

  45. PRINCIP Potenciometrie je elektrochemická metoda založená na měření napětí elektrochemického článku za bezproudého stavu. dvě elektrody: • indikační (měřící) elektroda • referentní (srovnávací) elektroda

  46. Schéma:

  47. Elektrody indikační elektroda její potenciál závisí na složení roztoku referentní elektroda její potenciál je stabilní (konstantní, známý) Měřit přímo potenciál jako takový nelze  měříme rozdíl potenciálů (=napětí)

More Related