Épiblaste: couche externe du blastoderme Ectoderme neural (dorsal) Epiderme (ventral)

2. Contexte de l’article: • Épiblaste: couche externe du blastoderme • Ectoderme neural (dorsal) • Epiderme (ventral) • Gastrulation: blastoderme commence à couvrir le vitellus • Voies • Wnt canonique • PCP (Wnt non canonique)

3. Microscopie confocale

4. Comment la division est-elle orientéedans les différentes couches de l’épiblaste?  Orientation AV dans toutes les couches

5.  Selon la règle d’Hertwig, le fuseau a tendance à s’aligner avec la longueur de la cellule (contraintes géométriques) Expérience de double marquage (H2B-GFP + RFP) Détermination du lien entre l’orientation de la cellule et l’axe de la division  Division orthogonale à l’axe d’élongation de la cellule (opposé à la règle d’Hertwig)

6. Le fuseau mitotique est activement orienté dans l’épiblaste dorsal.  Quels sont les mécanismes moléculaires/les molécules impliqués?

7. Evaluer la fonction de Dsh  Utilisation de Xdd1 (forme mutante de Dsh qui bloque l’élongation de l’axe) • Xdd1 perturbe l’alignement AV dans toutes les couches de l’épiblaste • Les cellules se divisent avec une orientation du fuseau aléatoire (0 – 90°)

9. Xdd1 perturbe aussi la polarité de l’élongation de ces cellules • Les cellules se divisent selon des angles aléatoires plutôt que perpendiculairement à l’axe de leur longueur.

10. Xdd1 agit sur la convergence et l’extension du tissu dorsal • À l’issue de la gastrulation, l’embryon exprimant Xdd1 (b) a un axe AV plus court que le contrôle (a).

11. Utilisation de clones mosaïques de cellules exprimant Xdd1 dans un contexte wt: • La morphogenèse a lieu normalement • Les cellules exprimant Xdd1 ont une orientation de division aléatoire (avec une distribution comparable aux embryons Xdd1)  Xdd1 agit directement au niveau de la cellule

12. Voies Wnt canoniques et non canoniques (PCP) Voie PCP Voie Wnt  Dsh appartient aux 2 voies On cherche à distinguer ces 2 voies:  Utilisation de constructions Dsh:

13. Résultats obtenus avec les différentes constructions:  Inhibe PCP mais pas Wnt canonique  Bloque les 2 voies  Orientation de la division est aléatoire dans avec les 2 constructions  Dsh contrôle l’orientation de la division dans l’épiblaste dorsal indépendamment de la voie Wnt canonique

14. Blocage fonctionnel de la voie Wnt Utilisation d’antagonistes spécifiques:  Dickkopf-1 (Dkk1): antagoniste de LRP5/6  ICAT : inhibe la β-caténine Embryons Dsh (constructions Dsh)  somites avec une expansion médiolatérale Embryons Dkk1  phénotype différent, somites diminuées et tête élargie  Effet de Dsh différent de celui de Dkk1

15.  Dkk1 n’affecte pas l’alignement AV des divisions  résultats idem avec ICAT (utilisation de clones mosaïques)  La voie Wnt non canonique est donc bien impliquée dans la régulation de la division pendant la gastrulation.

16. PCP régule-t-il la division cellulaire orientée chez le poisson zèbre?  time lapse in vivo de Slb/Wnt11 mutants perte de fonction • Δslb : polarité moins prononcée • Suggère la présence de facteurs additionnels

17. Quel est le rôle de Stbm (strabismus)? • Injection de morpholino Stbm • divisions mitotiques ne sont plus alignées  Rôle important de Stbm dans l’orientation de la division

18. Lien entre orientation de la division et l’élongation de l’axe • Altération de la division orientée et de l’élongation de l’axe après inhibition de PCP • Embryons Xdd1 : • ont un axe plus court • division provoque un élargissement moindre

19. Conclusion • La division des cellules de l’épiblaste dorsal est orientée le long de l’axe AV • Les cellules se divisent perpendiculairement à leur sens d’élongation • Le fuseau mitotique est activement orienté dans l’épiblaste dorsal • C’est la voie PCP qui est impliquée • Strabismus (Stbm) agit sur la division cellulaire orientée  La division orientée participe de façon significative à l’extension de la gastrula Hypothèse: La division cellulaire orientée et l’intercalation collaborent à l’élongation de l’axe, les 2 mécanismes étant régulés par PCP