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LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

Soit en NITRITES NO 2 - : glucose produits oxydés + n e- NO 3 - + ……… + ……… NO 2 - + ………. nitrate réductase (stade nitrites). Soit en DIAZOTE N 2 : glucose produits oxydés + n e- NO 3 - + ……… + ……… N 2 + ………. nitrate réductase (stade diazote).

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LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR)

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Presentation Transcript

  1. Soit en NITRITESNO2- : glucose produits oxydés + n e- • NO3- + ……… + ……… NO2- + ……… nitrate réductase (stade nitrites) • Soit en DIAZOTEN2 : glucose produits oxydés + n e- • NO3- + ……… + ……… N2 + ……… nitrate réductase (stade diazote) LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 1. Intérêt Ce milieu liquide permet de mettre en évidence la présence d’une enzyme du métabolisme énergétique : la NITRATE RÉDUCTASE. 2. Composition Bouillon nutritif additionné de nitrate de sodium NaNO3 (1% = 1 g / 100 mL) 3. Principe Dans la respiration nitraté, les ions NITRATES NO3- sont réduits par la nitrate réductase :

  2. LE RÉACTIF DE GRIESS : • Composition : Acide sulfanilique (nitrite 1) + a-naphtylamine (nitrite 2) • Rôle : mise en évidence des ions nitrites NO2- : Réactif de Griess + ions nitrites NO2-COMPLEXE ROUGE LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) • LE ZINC (Zn) : • Composition : Zinc pur (en poudre) • Rôle : mise en évidence des ions nitrates NO3- : Le Zinc catalyse la réduction des ions nitrates NO3- (éventuellement présents) en ions nitrites NO2-. Ces ions nitrites NO2- peuvent alors réagir avec le réactif de Griess pour former un complexe rouge 4. Technique d’ensemencement (cf. Fiche Technique)

  3. NIT1 NIT 2 LE BOUILLON NITRATÉ : Recherche de la Nitrate Réductase (NR) 5. Lecture (après avoir vérifié la présence de culture dans le tube) Observation : coloration rouge Interprétation : présence de NO2- issus de la réduction des NO3- Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade NO2-) Observation : pas de coloration rouge Interprétation : pas de présence de NO2- issus des NO3-. Les NO3- été réduits en N2 par la bactérie Conclusion : NITRATE REDUCTASE + (stade N2) Réactif de Griess (nit1 + nit2) Zinc Observation : coloration rouge Interprétation : le Zn a réduit les NO3- encore présents en NO2- qui sont révélés par le réactif de Griess. => Pas de réduction de NO3- en N2 Conclusion : NITRATE REDUCTASE -

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