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PESQUISA DE PATÓGENOS

Controle Microbiológico de Produtos não estéreis. PESQUISA DE PATÓGENOS. Pesquisa de Patógenos Microrganismos a serem pesquisados devido à sua presença indesejável nas formulações farmacêuticas, segundo Resolução 481/99 : - Staphylococcus aureus - nas preparações tópicas em Geral.

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PESQUISA DE PATÓGENOS

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Presentation Transcript

  1. Controle Microbiológico de Produtos não estéreis PESQUISA DE PATÓGENOS

  2. Pesquisa de Patógenos • Microrganismos a serem pesquisados devido à sua presença indesejável nas formulações farmacêuticas, segundo Resolução 481/99: • - Staphylococcusaureus - nas preparações tópicas em Geral. • - Pseudomonasaeruginosa - preparações tópicas, principalmente para áea dos olhos. • - Escherichiacoli - nas preparações orais. • Salmonellasp - Nas preparações orais. • Obs. Pode ser tb interessante a pesquisa de outras cepas ou grupos microorganismos, tais como coliformes.

  3. Staphylococcusaureus • Staphylococcusaureus – FamiliaStaphylococcaceae – Coco Gram (+) cacho de uva – Anaeróbios facultativos • Doenças – Infecções cutâneas – Infecções oportunistas – Das vias urinárias – Sistêmicas potencialmente fatais

  4. Pseudomonasaeruginosa • Pseudomonasaeruginosa – Bacilo Gram (-) – Anaeróbios facultativos • Infecta – Aparelho pulmonar – Aparelho urinário – Queimaduras – Infecções Sanguíneas

  5. Escherichiacoli • Escherichiacoli – FamiliaEnterobacteriaceae – Bacilo Gram (-) flagelado – Anaeróbios facultativos – Fermentadores de açúcares - Lactose (+) • Doenças – Gastroenterites

  6. Salmonellasp • Salmonella – FamiliaEnterobacteriaceae – Bastonetes Gram (-) flagelado – Anaeróbios facultativos – Fermentadores de açúcares • Sintomas da Salmonelose – Febre – Náuseas – Vômito – Diarréia

  7. Procedimentos: • Sofrem pequenas distinções entre os vários compêndios oficiais, entretanto os aspectos básicos são mantidos. • Segue- se apenas com a citação dos diferentes meios de cultura recomendados.

  8. Sequência para execução das etapas para realizar pesquisa de patógenos em amostras de produtos não estéreis: • Amostragem matéria-prima, medicamentos ou cosméticos não estéreis; • Determinação tomada de ensaio da amostra a ser analisada; • Enriquecimento não seletivo da amostra; • Isolamento seletivo utilizando meios cultura seletivos; • Realização coloração de gram e provas bioquímicas pertinentes.

  9. Meios de Enriquecimento • Tomada de ensaio: 10 g(mL). • Enriquecimento não seletivo (100 mL): • - Caldo lactose (CL): Escherichia coli e Salmonella sp • - Caldo caseína-soja (TSB): Staphylococcusaureus e Pseudomonasaeruginosa. • Ambos incuba: 35 – 37ºC - 24 a 48 horas • Enriquecimento seletivo para Salmonellasp: • - 10 mL da suspensão resultante do caldo não seletivo para os caldos tetrationato (100mL) e selenito-cistina (100mL) por 24 horas a 36±1ºC.

  10. Meios de Diferenciação - Após enriquecimento seletivo e não-seletivo (Salmonella sp), alíquotas são transferidas, por repique (estria), para meios de cultura para isolamento e diferenciação visando a identificação do microorganismo.

  11. Staphylococcusaureus • ÁgarBaird Parker – colônias pretas, halo transparente.

  12. Staphylococcusaureus Ágar Vogel-Johnson • colônias pretas, halo amarelo Ágar Manitol • colônias amarelas, halo amarelo Meio de cultura sem inoculação Ágar Manitol Ágar Vogel-Johnson

  13. Pseudomonasaeruginosa • ÁgarPseudomonas Base – colônias amareladas a douradas • Ágar Cetrimida – colônias esverdeadas com fluorescência Placa não-inoculada Placa inoculada Pseudomonas aeruginosa

  14. Pseudomonasaeruginosa • ÁgarPseudomonas para Fluoresceína (A e C) – colônias claras e amarelas, com fluorescência amarela. • ÁgarPseudomonas para Piocianina (B e D) – colônias esverdeadas, com fluorescência azul.

  15. Escherichiacoli • Ágar Mac Conkey – colônias vermelho-tijolo a púrpura – com halo de precipitação de bile • Ágar Eosina-Azul de metileno (EMB) • – colônias vermelho-escuras, brilho metálico

  16. Escherichiacoli • Ágar Endo • – colônias rosadas a vermelho, brilho metálico.

  17. Salmonellasp • Enriquecimento seletivo – caldo selenito-cistina e tetrationato • Meio de isolamento • Ágar Verde Brilhante – colônias transparentes • Ágar sulfito de bismuto • – colônias pretas ou esverdeadas

  18. Teste de promoção de crescimento dos meios • Verificar a capacidade de promoção de crescimento do meio de cultura. • São utilizados microrganismos testes: – Para TSB (tryptonesoyabroth) , TSA (tryptonesoyaagar) : S.aureus e P. aeruginosa – Para CL (caldo lactose): E.coli e Salmonella – Para Sabouraud: C.albicans

  19. Conforme Portaria 348/97 que determina a todos estabelecimentos produtores de Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes, o cumprimento das Diretrizes estabelecidas no Regulamento Técnico - Manual de Boas Práticas de Fabricação para Produtos de Higiene Pessoal, Cosméticos e Perfumes. TSA (Tryptone Soya Ágar) como meio de crescimento para bactérias, incubação a 35 a 37º C, durante 48h. SDA (Sabouraud Dextrose Ágar) como meio de crescimento para fungos, incubação a 20-25º C, durante 7 dias.

  20. MÉTODO DE ANÁLISE DE PRODUTOS NÃO ESTÉREIS 10g 1mL 1mL Inativante + diluente 90 mL Inativante + diluente 9 mL Inativante + diluente 9 mL Pote de creme 10-3 10-1 10-2 0,1mL 0,1mL 0,1mL 10g 10g TSB CL fungos bactérias SAB CETR TSA Staphylococcus MAN. SALM Mac E. coli Salmonella Pseudomonas

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